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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于pPIC9K载体克隆遇到的问题
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匿名

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1楼 2017-05-16 15:44:18
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781055707

木虫 (著名写手)
你是怎么确定酶就一定把你的目的基因给切开的那？
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2017-05-17 08:07:59
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匿名

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3楼2017-05-17 08:43:16
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-05-17 08:43:16
跑电泳，起码质粒的形态不同了，成了条带状，而且用的是taraka的内切酶，不知我这样判断对不对？
...

不是质粒，是PCR产物的目的片段。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2017-05-17 09:49:06
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匿名

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5楼2017-05-17 10:01:09
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
你用的是哪两个酶切位点
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6楼2017-05-17 17:11:35
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匿名

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7楼2017-05-17 21:15:56
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-25 07:43:45
引用回帖:
7楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-05-17 21:15:56
EcoRI   NotI
...

我做过这俩位点的克隆，很顺利，你的问题主要是不长单克隆，你先转一个空载体pPIC9K到大肠杆菌，看能不能长出单克隆。（验证载体无误）
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8楼2017-05-18 09:01:48
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9楼2017-05-18 11:36:46
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
guoxhyy: 金币+1 2017-05-18 13:26:03
首先保证片段的引物设计、PCR、酶切和回收没有问题。然后是载体是酶切和回收，最后是连接和转化。涉及的步骤、工具酶、抗生素和感受态都验证一下。
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想做一位科研好人
10楼2017-05-18 11:52:11
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