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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于pPIC9K载体克隆遇到的问题
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匿名

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31楼2017-05-24 21:36:42
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

觉得你可以考虑用infusion 去做了

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竹杖芒鞋轻胜马，谁怕，一蓑烟雨任平生；回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴
32楼2017-05-24 23:24:42
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-05-17 10:01:09
这个，我还真是没法判断。应该如何判断呢？我已经酶切过两次了，过夜切的～
...

我如果排除了其他因素，如T4DNA连接酶是好的，，抗性是好的，无法判断目的片段是否切动时，就把目的片段连到T载体上，在切下来。
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采菊东篱下，悠然见南山。
33楼2017-05-25 08:24:50
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匿名

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34楼2017-05-25 11:19:46
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匿名

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35楼2017-06-01 17:25:58
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我好暴躁啊

新虫 (小有名气)
都是过夜切的，1ug载体我用3ul的酶去切的

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36楼2017-06-01 18:48:16
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gw254404163

新虫 (正式写手)
推荐使用同源重组的方法

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37楼2017-06-01 23:37:51
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匿名

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38楼2017-06-02 07:07:29
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yangchenyhl

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你可以把pcr产物别酶切直接连T载，筛到阳性克隆后再酶切，把目的基因切下来，连接。判断载体有没有切好，可以将酶切好的载体，用水代替片段，加酶做连接转化，如果长得很多就证明载体没切好，长得比较少的话，可以将就着用。载体也可以试试分步酶切
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39楼2017-06-02 11:38:31
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gw254404163

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
38楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-06-02 07:07:29
我没用过，怎么同源重组呢
...

利用线性载体两端和片段两端相同的序列，用同源重组酶，具体可在网上看看，近岸生物有个重组酶，很好用

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40楼2017-06-02 18:32:03
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