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Zhibao1994

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专业: 植物病理学

[求助] 质粒转化实验已有2人参与

向各位请教下关于DNA质粒转化实验。我最近在做质粒转化实验，将老师合成的质粒转入农杆菌中。第一步是将细胞从零下八十摄氏度中取出放入冰盒中半个小时，同时预冷两个1.5ml的离心管，待细胞融化后，将细胞分装于两个离心管（离心管已标注转化的质粒名称），各100ul,第二步：加入2ul的质粒，在冰上30分钟。热击（42度，45秒)，然后冰上放2分钟。第三步：加入SOC 0.9ml，然后在37度中培养一个小时，离心10分钟，4000转每分钟。涂板（Kan，LB），37度培养隔夜观察。老是只能看到几个菌落。

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端

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1楼 2017-05-08 23:50:45

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Zhibao1994

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 贱贱JMe at 2017-05-10 16:20:09
你确定是使用农杆菌感受态来做的吗，按照你的描述应该是DH5α的操作步骤。如果确定是农杆菌转化，步骤是不正确的，而且农杆菌的生长需要2-3天，过夜没有很正常。
农杆菌转化步骤：
1、加1ug DNA于200ul感受态细胞 ...

搞错了，我做的就是DH5a感受态细胞。

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