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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Zhibao1994

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 质粒转化实验 已有2人参与

向各位请教下关于DNA质粒转化实验。我最近在做质粒转化实验，将老师合成的质粒转入农杆菌中。第一步是将细胞从零下八十摄氏度中取出放入冰盒中半个小时，同时预冷两个1.5ml的离心管，待细胞融化后，将细胞分装于两个离心管（离心管已标注转化的质粒名称），各100ul,第二步：加入2ul的质粒，在冰上30分钟。热击（42度，45秒)，然后冰上放2分钟。第三步：加入SOC 0.9ml，然后在37度中培养一个小时，离心10分钟，4000转每分钟。涂板（Kan，LB），37度培养隔夜观察。老是只能看到几个菌落。

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-05-08 23:50:45
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海忆梦奇

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
5楼: Originally posted by HZNU2013 at 2017-05-10 07:53:08
转化弄杆菌:冰置30分钟，37度1分钟液氮2分钟重复一次，冰置5分钟，加不含抗生素LB，30度摇3个小时，涂板，30度倒置培养过夜。

弱弱问一下，涂板前的摇菌不小心加上抗生素了，还能长菌吗？
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13楼2017-05-12 11:45:48
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stone2239

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-10 07:54:43
换感受态试试，另外长的几个菌落是不是阳性菌落呢？如果是倒也不必纠结
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2楼2017-05-09 15:10:52
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风霜非暖

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
农杆菌应该是28度培养吧

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3楼2017-05-09 23:02:20
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Zhibao1994

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2017-05-09 15:10:52
换感受态试试，另外长的几个菌落是不是阳性菌落呢？如果是倒也不必纠结

pMK_ppvtmv质粒转到Dh5a细胞有，但前天做的几个质粒却没有

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4楼2017-05-10 06:27:37
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