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chengzi0223

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[求助] pcr p不出来，请大神们指教d(?д??)已有2人参与

才进行pcr，结果p了几次p不出来，但是p出来的胶图上在 10000多都有条带，模板是质粒，目的基因不到2000bp，现在有点懵，请大神们指教

@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫Android客户端

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1楼2017-05-02 15:20:52

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不要在意我

新虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-03 07:42:01

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5楼: Originally posted by chengzi0223 at 2017-05-02 22:12:47
我同学也这样说，如果是质粒大小的话，是引物设计错误吗？
...

你这给的信息太少了，有好多可能。模板浓度，引物，酶浓度，pcr条件都有可能P不出来。一般酶的话查一下一般体系浓度，购买的像高保真酶就按说明书的要求调整一下。你可以先测一下质粒浓度

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10楼2017-05-02 23:22:41

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yekongdea

铜虫 (职业作家)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-02 19:27:01

是不是质粒加的太多了，100ng足以，量太多有可能跑不出来

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4楼2017-05-02 18:37:29

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chengzi0223

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 不要在意我 at 2017-05-02 15:29:13
那一万多就是你的质粒的大小吧？

我同学也这样说，如果是质粒大小的话，是引物设计错误吗？

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5楼2017-05-02 22:12:47

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不要在意我

新虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:20:29

引用回帖:

10楼: Originally posted by 不要在意我 at 2017-05-02 23:22:41
你这给的信息太少了，有好多可能。模板浓度，引物，酶浓度，pcr条件都有可能P不出来。一般酶的话查一下一般体系浓度，购买的像高保真酶就按说明书的要求调整一下。你可以先测一下质粒浓度
...

体系浓度和条件没问题的话，就查一下引物吧，重新设计。你也可以先菌液pcr试试

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11楼2017-05-02 23:25:06

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