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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr p不出来，请大神们指教d(?д??)
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chengzi0223

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr p不出来，请大神们指教d(?д??) 已有2人参与

才进行pcr，结果p了几次p不出来，但是p出来的胶图上在 10000多都有条带，模板是质粒，目的基因不到2000bp，现在有点懵，请大神们指教

@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-05-02 15:20:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

不要在意我

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-03 07:42:01
引用回帖:
5楼: Originally posted by chengzi0223 at 2017-05-02 22:12:47
我同学也这样说，如果是质粒大小的话，是引物设计错误吗？
...

你这给的信息太少了，有好多可能。模板浓度，引物，酶浓度，pcr条件都有可能P不出来。一般酶的话查一下一般体系浓度，购买的像高保真酶就按说明书的要求调整一下。你可以先测一下质粒浓度

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10楼2017-05-02 23:22:41
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yekongdea

铜虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-02 19:27:01
是不是质粒加的太多了，100ng足以，量太多有可能跑不出来

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4楼2017-05-02 18:37:29
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chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不要在意我 at 2017-05-02 15:29:13
那一万多就是你的质粒的大小吧？

我同学也这样说，如果是质粒大小的话，是引物设计错误吗？

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5楼2017-05-02 22:12:47
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不要在意我

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:20:29
引用回帖:
10楼: Originally posted by 不要在意我 at 2017-05-02 23:22:41
你这给的信息太少了，有好多可能。模板浓度，引物，酶浓度，pcr条件都有可能P不出来。一般酶的话查一下一般体系浓度，购买的像高保真酶就按说明书的要求调整一下。你可以先测一下质粒浓度
...

体系浓度和条件没问题的话，就查一下引物吧，重新设计。你也可以先菌液pcr试试

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11楼2017-05-02 23:25:06
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chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by chengzi0223 at 2017-05-02 23:26:18
模板浓度140ng/ul还有一个是80ng/ul，引物是10um/ul
...

酶是高保真聚合酶，照着说明书用的

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13楼2017-05-02 23:27:15
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不要在意我

新虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 不要在意我 at 2017-05-02 23:33:07
应助回帖点错了，sorry
...

你先用普通酶试试，高保真酶我同学也有用过，有时普通酶能p出来，高保真酶却用不好

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15楼2017-05-02 23:34:48
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普通回帖

不要在意我

新虫 (正式写手)
那一万多就是你的质粒的大小吧？

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2楼2017-05-02 15:29:13
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yekongdea

铜虫 (职业作家)
质粒跑p应该很简单的啊

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3楼2017-05-02 18:36:24
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chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yekongdea at 2017-05-02 18:36:24
质粒跑p应该很简单的啊

没做之前也觉得很简单啊啊，可是就是p不出来，求赐教～

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6楼2017-05-02 22:13:38
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chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yekongdea at 2017-05-02 18:37:29
是不是质粒加的太多了，100ng足以，量太多有可能跑不出来

100ng/ul？就是差不多这个浓度，测了，质粒图也跑了，模板应该没问题

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7楼2017-05-02 22:14:31
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YAODACHOU

新虫 (小有名气)
引物有错吗？是不是反向了，恰恰漏了目的片段？测个序跟质粒比对下

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8楼2017-05-02 22:40:56
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chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by YAODACHOU at 2017-05-02 22:40:56
引物有错吗？是不是反向了，恰恰漏了目的片段？测个序跟质粒比对下

引物没有反，这个可以确定

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9楼2017-05-02 22:43:28
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