应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr p不出来，请大神们指教d(?д??)
371/4返回列表1234下一页
查看: 2707  |  回复: 36
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

chengzi0223

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr p不出来，请大神们指教d(?д??) 已有2人参与

才进行pcr，结果p了几次p不出来，但是p出来的胶图上在 10000多都有条带，模板是质粒，目的基因不到2000bp，现在有点懵，请大神们指教

@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-05-02 15:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

不要在意我

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-03 07:42:01
引用回帖:
5楼: Originally posted by chengzi0223 at 2017-05-02 22:12:47
我同学也这样说，如果是质粒大小的话，是引物设计错误吗？
...

你这给的信息太少了，有好多可能。模板浓度，引物，酶浓度，pcr条件都有可能P不出来。一般酶的话查一下一般体系浓度，购买的像高保真酶就按说明书的要求调整一下。你可以先测一下质粒浓度

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2017-05-02 23:22:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yekongdea

铜虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-02 19:27:01
是不是质粒加的太多了，100ng足以，量太多有可能跑不出来

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-05-02 18:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不要在意我 at 2017-05-02 15:29:13
那一万多就是你的质粒的大小吧？

我同学也这样说，如果是质粒大小的话，是引物设计错误吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-05-02 22:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不要在意我

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-06 08:20:29
引用回帖:
10楼: Originally posted by 不要在意我 at 2017-05-02 23:22:41
你这给的信息太少了，有好多可能。模板浓度，引物，酶浓度，pcr条件都有可能P不出来。一般酶的话查一下一般体系浓度，购买的像高保真酶就按说明书的要求调整一下。你可以先测一下质粒浓度
...

体系浓度和条件没问题的话，就查一下引物吧，重新设计。你也可以先菌液pcr试试

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2017-05-02 23:25:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by chengzi0223 at 2017-05-02 23:26:18
模板浓度140ng/ul还有一个是80ng/ul，引物是10um/ul
...

酶是高保真聚合酶，照着说明书用的

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2017-05-02 23:27:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不要在意我

新虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 不要在意我 at 2017-05-02 23:33:07
应助回帖点错了，sorry
...

你先用普通酶试试，高保真酶我同学也有用过，有时普通酶能p出来，高保真酶却用不好

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2017-05-02 23:34:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

不要在意我

新虫 (正式写手)
那一万多就是你的质粒的大小吧？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-05-02 15:29:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yekongdea

铜虫 (职业作家)
质粒跑p应该很简单的啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-05-02 18:36:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yekongdea at 2017-05-02 18:36:24
质粒跑p应该很简单的啊

没做之前也觉得很简单啊啊，可是就是p不出来，求赐教～

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-05-02 22:13:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yekongdea at 2017-05-02 18:37:29
是不是质粒加的太多了，100ng足以，量太多有可能跑不出来

100ng/ul？就是差不多这个浓度，测了，质粒图也跑了，模板应该没问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-05-02 22:14:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YAODACHOU

新虫 (小有名气)
引物有错吗？是不是反向了，恰恰漏了目的片段？测个序跟质粒比对下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-05-02 22:40:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by YAODACHOU at 2017-05-02 22:40:56
引物有错吗？是不是反向了，恰恰漏了目的片段？测个序跟质粒比对下

引物没有反，这个可以确定

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-05-02 22:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chengzi0223 的主题更新
371/4返回列表1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭