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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr p不出来，请大神们指教d(?д??)
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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)
信息贴全一点，比如引物，比如质粒...

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21楼2017-05-03 09:56:54
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半点心

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我有一个也是800ng/ul的质粒 加了1ul的样品，跟250ng/ul的质粒做对照，都是加样1ul。PCR 电泳，800的还没有250的亮。
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该签名无法显示,系统分析两种可能:一.你需要重新启动电脑;二.你的诚意不够,欲解决,马上邀请该联系人吃饭..
22楼2017-05-03 13:46:40
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半点心

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yekongdea at 2017-05-02 18:37:29
是不是质粒加的太多了，100ng足以，量太多有可能跑不出来

太多的极限是多少呢，我有一次加了800ng，跑出来还没250ng的亮。跟太浓有关？
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该签名无法显示,系统分析两种可能:一.你需要重新启动电脑;二.你的诚意不够,欲解决,马上邀请该联系人吃饭..
23楼2017-05-03 13:48:36
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lusandanooo

银虫 (小有名气)
模板太多了吧，觉得PCR模板有个几纳克应该就行了。觉得引物不对用通用引物先P下试试。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
24楼2017-05-03 14:52:10
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chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
24楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-05-03 14:52:10
模板太多了吧，觉得PCR模板有个几纳克应该就行了。觉得引物不对用通用引物先P下试试。

通用引物？这个没听说过，求解释

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25楼2017-05-03 21:26:19
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chengzi0223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 半点心 at 2017-05-03 13:48:36
太多的极限是多少呢，我有一次加了800ng，跑出来还没250ng的亮。跟太浓有关？...

浓度太高了好像不行

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26楼2017-05-03 21:26:37
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chibang1220

木虫 (著名写手)
怀疑引物设计的问题

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人的差别在于业余时间
27楼2017-05-05 10:25:36
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
保证体系没有问题的前提下，多试试不同的退火温度，有时候序列gc含量高需要添加一下dmso或者换一些酶

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28楼2017-05-05 15:52:47
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elabscience

新虫 (小有名气)
引物设计问题吧
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专注科学研究
29楼2017-05-05 16:57:34
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channeyeol

新虫 (初入文坛)
我目前也在处理同一种问题 模版以前测没问题 需要调平时突然检测不出来 酶不断更换对比 模版从质粒变成标准品 pcr程序也做了对比 标准品测出来部分需要的 只能把质粒重新送测找原因

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30楼2017-05-05 18:09:15
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