【答案】应助回帖

21楼2017-05-03 09:56:54

半点心

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【答案】应助回帖

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我有一个也是800ng/ul的质粒加了1ul的样品，跟250ng/ul的质粒做对照，都是加样1ul。PCR 电泳，800的还没有250的亮。

该签名无法显示,系统分析两种可能:一.你需要重新启动电脑;二.你的诚意不够,欲解决,马上邀请该联系人吃饭..

22楼2017-05-03 13:46:40

半点心

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引用回帖:

4楼: Originally posted by yekongdea at 2017-05-02 18:37:29
是不是质粒加的太多了，100ng足以，量太多有可能跑不出来

太多的极限是多少呢，我有一次加了800ng，跑出来还没250ng的亮。跟太浓有关？

该签名无法显示,系统分析两种可能:一.你需要重新启动电脑;二.你的诚意不够,欲解决,马上邀请该联系人吃饭..

23楼2017-05-03 13:48:36

lusandanooo

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模板太多了吧，觉得PCR模板有个几纳克应该就行了。觉得引物不对用通用引物先P下试试。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻

24楼2017-05-03 14:52:10

chengzi0223

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24楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-05-03 14:52:10
模板太多了吧，觉得PCR模板有个几纳克应该就行了。觉得引物不对用通用引物先P下试试。

通用引物？这个没听说过，求解释

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25楼2017-05-03 21:26:19

chengzi0223

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23楼: Originally posted by 半点心 at 2017-05-03 13:48:36
太多的极限是多少呢，我有一次加了800ng，跑出来还没250ng的亮。跟太浓有关？...

浓度太高了好像不行

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26楼2017-05-03 21:26:37

chibang1220

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怀疑引物设计的问题

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人的差别在于业余时间

27楼2017-05-05 10:25:36

stevenshi021

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保证体系没有问题的前提下，多试试不同的退火温度，有时候序列gc含量高需要添加一下dmso或者换一些酶

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28楼2017-05-05 15:52:47

elabscience

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引物设计问题吧

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29楼2017-05-05 16:57:34

channeyeol

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我目前也在处理同一种问题模版以前测没问题需要调平时突然检测不出来酶不断更换对比模版从质粒变成标准品 pcr程序也做了对比标准品测出来部分需要的只能把质粒重新送测找原因

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30楼2017-05-05 18:09:15