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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么每次测序都不成功？
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祁岚起风

新虫 (初入文坛)

[交流] 为什么每次测序都不成功？ 已有7人参与

1000bp左右的基因，pcr扩增，菌液pcr，酶切什么的跑的电泳都没问题，但是不知道为什么三次测序都不成功，第一次是碱基突变，第二次是完全对不上，第三次是开头少了几个bp，真的是太郁闷了，都重新扩好几次了，但还是找不到是什么问题，求解╮(╯_╰)╭

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1楼 2017-04-30 23:27:23
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lyz65956

木虫 (正式写手)
★
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菌液划平板，分单菌落去测序。可以考虑换条测序引物
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对自己更好点
5楼2017-05-01 16:01:25
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周丽娟10000

禁虫 (小有名气)
★
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2楼2017-04-30 23:32:07
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祁岚起风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 周丽娟10000 at 2017-04-30 23:32:07
Pcr 产物建议胶回收，不要直接纯化，还有降低pcr 体系中的模版量

pcr产物没有纯化，每次都是做了胶回收后加Blunt载体链接后才做的转化，两个引物加的都是1ul，不多

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3楼2017-05-01 08:26:24
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fcl12345

新虫 (正式写手)
★
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同源重组还是双酶切连入载体的？

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4楼2017-05-01 09:48:12
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祁岚起风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fcl12345 at 2017-05-01 09:48:12
同源重组还是双酶切连入载体的？

双酶切

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6楼2017-05-01 17:27:16
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fcl12345

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我之前也遇到过一些问题，碱基缺失，不过我用点突变突变回来了。

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7楼2017-05-01 23:30:32
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长
引用回帖:
7楼: Originally posted by fcl12345 at 2017-05-01 23:30:32
我之前也遇到过一些问题，碱基缺失，不过我用点突变突变回来了。

6666

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耻与众草之为伍，何亭亭而独芳！何不为人之所赏兮，深山穷谷委严霜。
8楼2017-05-01 23:42:11
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baichi121234

禁虫 (职业作家)
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9楼2017-05-02 00:17:58
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dadaoxing

禁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼2017-05-06 10:02:12
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