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海燕追梦

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菌液pcr
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菌液pcr出不来了，菌液pcr的程序，体系应该注意那些问题呢 ？阳参始终出不来，但是换用其它高保真的酶就能p出来，虽然说不同的酶有不同的程序，之前正常pcrTaq酶能出来的，但是为什么Taq酶放在菌液pcr出不来了，阳参都不出。。。。。。。求大神指点一下。出来讨论一下可以吗？

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1楼 2017-04-30 20:22:11
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Sean2010

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引用回帖:
33楼: Originally posted by 海燕追梦 at 2017-04-30 21:52:43
是的，相同的pcr体系，Taq酶出不来，其他高保真酶就可以，我想知道它们的pcr程序不一样(热变性，和退火温度的时间不一样)影响会特别大吗？
...

其实貌似是跟引物的退火温度关系更大些，虽然酶的活性和保真性也会影响（结合到模板和引物上啥的）。
我之前试过Taq酶体系优化。从镁离子开始（缓冲溶液不需要优化，引物浓度如果其他高保真酶p的出来也没必要变，dNTP应该也是一定的）。
还有的话退火温度可以比预测的低2-3度试试。
最后一个可能是：你其他高保真酶用了touch down？循环是怎么设计的？
最最后一个小问题：引物二聚体你能在胶的前沿看到吗？

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34楼2017-05-01 02:28:06
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pandongzi2楼
2017-04-30 20:22   回复  
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coppelia3楼
2017-04-30 20:22   回复  
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雨花田半亩4楼
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星期天与飞5楼
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152801126楼
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keyanxmc7楼
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氢风kelly8楼
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cffyau9楼
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eiri10楼
2017-04-30 20:23   回复  
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zzp62311楼
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坚持奋斗12楼
2017-04-30 20:23   回复  
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Simon_taller13楼
2017-04-30 20:23   回复  
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alva38614楼
2017-04-30 20:23   回复  
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