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z457634588

木虫 (小有名气)

[求助] 生物小白有问题请教。 已有3人参与

提取组织中微生物DNA,用的试剂盒,用引物pcr扩增以后条带很浅,不足以能够送去测序,请问有什么办法能够提高我的浓度么?pcr产物回收?还是什么?希望有大神指教呀。

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2511956298

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-24 22:39:16
不能增加循环数,把循环数增加到36,然后送PCR产物测序,按理来说突变率千分之一
2楼2017-04-24 17:24:41
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-24 22:39:28
首先不知道你的PCR条件有没有摸索,是否合适,包括你的模板浓度,引物退火温度等,如果你的条带特异性很好,可以通过增加循环数来提高浓度,如果不行,可以尝试增加扩增体系,然后通过过柱浓缩来提高目的基因浓度,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2017-04-24 18:52:59
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z457634588

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-04-24 18:52:59
首先不知道你的PCR条件有没有摸索,是否合适,包括你的模板浓度,引物退火温度等,如果你的条带特异性很好,可以通过增加循环数来提高浓度,如果不行,可以尝试增加扩增体系,然后通过过柱浓缩来提高目的基因浓度, ...

同一批提取的基因组DNA,大部分都能够P出来,只是个别几个样品,基因组浓度低,PCR以后条带很浅,我是要送去高通量测序的。现在的状况就是,基因组是有的,就是浓度低,该如何进行下一步,能够让我PCR扩增出来的条带变亮
4楼2017-05-10 15:48:39
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z457634588

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 2511956298 at 2017-04-24 17:24:41
不能增加循环数,把循环数增加到36,然后送PCR产物测序,按理来说突变率千分之一

嗯嗯,这我知道,因为我是要送去测序的,增加循环数,就不准确了。所以现在就想有什么办法可以提高我PCR产物浓度或者基因组浓度。
5楼2017-05-10 15:49:48
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

【答案】应助回帖

扩大体系,回收之后二次扩增。另外以基因组为模板进行PCR时减小模板的加入量,减少,尝试一下。
想做一位科研好人
6楼2017-05-10 15:58:55
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