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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 生物小白有问题请教。
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z457634588

木虫 (小有名气)

[求助] 生物小白有问题请教。 已有3人参与

提取组织中微生物DNA,用的试剂盒，用引物pcr扩增以后条带很浅，不足以能够送去测序，请问有什么办法能够提高我的浓度么？pcr产物回收？还是什么？希望有大神指教呀。

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1楼 2017-04-24 17:01:36
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2511956298

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-24 22:39:16
不能增加循环数，把循环数增加到36，然后送PCR产物测序，按理来说突变率千分之一
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2楼2017-04-24 17:24:41
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-24 22:39:28
首先不知道你的PCR条件有没有摸索，是否合适，包括你的模板浓度，引物退火温度等，如果你的条带特异性很好，可以通过增加循环数来提高浓度，如果不行，可以尝试增加扩增体系，然后通过过柱浓缩来提高目的基因浓度，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2017-04-24 18:52:59
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z457634588

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-04-24 18:52:59
首先不知道你的PCR条件有没有摸索，是否合适，包括你的模板浓度，引物退火温度等，如果你的条带特异性很好，可以通过增加循环数来提高浓度，如果不行，可以尝试增加扩增体系，然后通过过柱浓缩来提高目的基因浓度， ...

同一批提取的基因组DNA，大部分都能够P出来，只是个别几个样品，基因组浓度低，PCR以后条带很浅，我是要送去高通量测序的。现在的状况就是，基因组是有的，就是浓度低，该如何进行下一步，能够让我PCR扩增出来的条带变亮
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4楼2017-05-10 15:48:39
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z457634588

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2511956298 at 2017-04-24 17:24:41
不能增加循环数，把循环数增加到36，然后送PCR产物测序，按理来说突变率千分之一

嗯嗯，这我知道，因为我是要送去测序的，增加循环数，就不准确了。所以现在就想有什么办法可以提高我PCR产物浓度或者基因组浓度。
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5楼2017-05-10 15:49:48
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

【答案】应助回帖

扩大体系，回收之后二次扩增。另外以基因组为模板进行PCR时减小模板的加入量，减少，尝试一下。
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想做一位科研好人
6楼2017-05-10 15:58:55
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