| 查看: 7571 | 回复: 14 | ||
[求助]
用赛默飞的T4连接酶连接目的基因和载体一直连接不上，求大神指点 已有1人参与
|
||
|
简单介绍一下：我的实验是通过免疫小鼠获得抗体轻链和重链的目的基因，通过XbaI和SacI酶切轻链与质粒载体后，胶回收，用T4连接酶连接。 体系按照T4连接酶说明书上，4ul Buffer，1ul T4连接酶，目的基因和载体的摩尔比为3:1，20ul的总体系。 轻链基因的浓度为70ng/ul（是酶切后用PCR回收试剂盒回收的，没有通过胶回收），载体浓度为55ng/ul（胶回收）。 16°过夜酶切，直接加loading buffer电泳，结果如图： 中间为连接条带，左右为15000和5000marker，我的目的基因为680bp，酶切后质粒为3600bp，连接后条带应该在4300上下。 结果却是感觉被降解了的电泳条带，不知是什么原因？ 求大神指点迷津，定重谢！  T4 lianjie 4.24.1.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有118人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
12楼2017-05-03 19:02:08
13楼2017-05-03 19:08:49
2楼2017-04-28 09:40:17
3楼2017-04-28 09:41:59
4楼2017-04-30 23:07:23
5楼2017-04-30 23:18:57
6楼2017-05-01 13:03:26
7楼2017-05-01 13:04:52
8楼2017-05-02 09:15:31
9楼2017-05-03 09:44:27
10楼2017-05-03 15:10:03