[求助] 用赛默飞的T4连接酶连接目的基因和载体一直连接不上，求大神指点 已有1人参与

简单介绍一下：我的实验是通过免疫小鼠获得抗体轻链和重链的目的基因，通过XbaI和SacI酶切轻链与质粒载体后，胶回收，用T4连接酶连接。 体系按照T4连接酶说明书上，4ul Buffer，1ul T4连接酶，目的基因和载体的摩尔比为3:1，20ul的总体系。 轻链基因的浓度为70ng/ul（是酶切后用PCR回收试剂盒回收的，没有通过胶回收），载体浓度为55ng/ul（胶回收）。 16°过夜酶切，直接加loading buffer电泳，结果如图： 中间为连接条带，左右为15000和5000marker，我的目的基因为680bp，酶切后质粒为3600bp，连接后条带应该在4300上下。 结果却是感觉被降解了的电泳条带，不知是什么原因？ 求大神指点迷津，定重谢！ T4 lianjie 4.24.1.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw

回复此楼

» 猜你喜欢

• Calderasib理化性质与实验操作技术笔记 已经有0人回复
• RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点 已经有0人回复
• 化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有268人回复
• 苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用 已经有0人回复
• 生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项 已经有0人回复
• 科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展 已经有0人回复
• BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点 已经有0人回复
• 富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征 已经有0人回复
• BT投稿with editor状态快两周了，正常吗 已经有25人回复
• Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈 已经有0人回复
• RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点 已经有0人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)