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用赛默飞的T4连接酶连接目的基因和载体一直连接不上，求大神指点 已有1人参与
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简单介绍一下：我的实验是通过免疫小鼠获得抗体轻链和重链的目的基因，通过XbaI和SacI酶切轻链与质粒载体后，胶回收，用T4连接酶连接。 体系按照T4连接酶说明书上，4ul Buffer，1ul T4连接酶，目的基因和载体的摩尔比为3:1，20ul的总体系。 轻链基因的浓度为70ng/ul（是酶切后用PCR回收试剂盒回收的，没有通过胶回收），载体浓度为55ng/ul（胶回收）。 16°过夜酶切，直接加loading buffer电泳，结果如图： 中间为连接条带，左右为15000和5000marker，我的目的基因为680bp，酶切后质粒为3600bp，连接后条带应该在4300上下。 结果却是感觉被降解了的电泳条带，不知是什么原因？ 求大神指点迷津，定重谢！  T4 lianjie 4.24.1.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
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