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chj8558

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[求助] HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！已有2人参与

我挑取HT115（DE3）（重组L4440）单克隆于LB液体培养基，37℃ 200r 振荡培养16h后。按1：100稀释，扩大培养至OD=0.4时，加IPTG（终浓度1mM）诱导4h，然后提取dsRNA。但是我做了几次就是没有表达出dsRNA，为什么呢？？？

求指教！！！@biostar2009

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1楼 2017-04-19 21:56:55

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chj8558

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2楼2017-04-22 01:10:03

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chj8558

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这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是为什么经过酶消化就没有条带了哪？？！！！

小弟刚开始做RNAi，请教各位大神，望不吝赐教！！！

诱导HT115菌表达dsRNA检测.jpg

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3楼2017-04-23 21:53:53

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rikku1518

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3楼: Originally posted by chj8558 at 2017-04-23 21:53:53
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是 ...

请问楼主最后找到原因了吗？

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4楼2018-07-23 15:17:21

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