应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！
51/1返回列表
查看: 4523  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

chj8558

新虫 (小有名气)

[求助] HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！ 已有2人参与

我挑取HT115（DE3）（重组L4440）单克隆于LB液体培养基，37℃ 200r 振荡培养16h后。按1：100稀释，扩大培养至OD=0.4时，加IPTG（终浓度1mM）诱导4h，然后提取dsRNA。但是我做了几次就是没有表达出dsRNA，为什么呢？？？求指教！！！@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-19 21:56:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kounu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 科研菜鸟6 at 2022-06-03 17:14:09
我最近也出现了这样情况，请问怎么解决的
...

您好，请问双链的问题最后解决了吗
赞一下 回复此楼
10楼2023-05-24 20:41:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

chj8558

新虫 (小有名气)
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是为什么经过酶消化就没有条带了哪？？！！！   小弟刚开始做RNAi，请教各位大神，望不吝赐教！！！
HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！
诱导HT115菌表达dsRNA检测.jpg
赞一下 回复此楼
3楼2017-04-23 21:53:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rikku1518

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chj8558 at 2017-04-23 21:53:53
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是 ...

请问楼主最后找到原因了吗？
赞一下 回复此楼
4楼2018-07-23 15:17:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西区五号楼

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rikku1518 at 2018-07-23 15:17:21
请问楼主最后找到原因了吗？...

你好，我最近打算做昆虫的RNA干扰，想用大肠杆菌表达。但是在看文献的过程中，看到了表达载体是pET-2p，文献中说是由pET-30（a）+改造得来的，查了好多也没有看到具体的改造方法；还有用到的感受态是HT115菌株（RNA酶III缺失的BL21），这个感受态是可以购买吗？可以交流一下吗？
赞一下 回复此楼
5楼2018-10-25 10:06:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 14:09 by winsaint
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +12 晴天加油 2026-08-26 13/650 2026-08-28 11:32 by skyjudy
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +10 Kittylucky 2026-08-27 11/550 2026-08-28 10:45 by Kittylucky
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +7 苏东坡二世 2026-08-23 7/350 2026-08-27 18:14 by 瞬息宇宙
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭