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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！
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chj8558

新虫 (小有名气)

[求助] HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！已有2人参与

我挑取HT115（DE3）（重组L4440）单克隆于LB液体培养基，37℃ 200r 振荡培养16h后。按1：100稀释，扩大培养至OD=0.4时，加IPTG（终浓度1mM）诱导4h，然后提取dsRNA。但是我做了几次就是没有表达出dsRNA，为什么呢？？？求指教！！！@biostar2009
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1楼2017-04-19 21:56:55
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chj8558

新虫 (小有名气)
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是为什么经过酶消化就没有条带了哪？？！！！   小弟刚开始做RNAi，请教各位大神，望不吝赐教！！！
HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！
诱导HT115菌表达dsRNA检测.jpg
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3楼2017-04-23 21:53:53
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rikku1518

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chj8558 at 2017-04-23 21:53:53
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是 ...

请问楼主最后找到原因了吗？
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4楼2018-07-23 15:17:21
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rikku1518 at 2018-07-23 15:17:21
请问楼主最后找到原因了吗？...

你好，我最近打算做昆虫的RNA干扰，想用大肠杆菌表达。但是在看文献的过程中，看到了表达载体是pET-2p，文献中说是由pET-30（a）+改造得来的，查了好多也没有看到具体的改造方法；还有用到的感受态是HT115菌株（RNA酶III缺失的BL21），这个感受态是可以购买吗？可以交流一下吗？
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5楼2018-10-25 10:06:28
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9440jizhu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chj8558 at 2017-04-23 21:53:53
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是 ...

您好，我最近也在做这个实验，也是出现同样的状况，请问您解决了吗，想跟您一起探讨一下，一起进步，谢谢。
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6楼2020-12-14 21:26:04
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