应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！
51/1返回列表
查看: 4187  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

chj8558

新虫 (小有名气)

[求助] HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！ 已有2人参与

我挑取HT115（DE3）（重组L4440）单克隆于LB液体培养基，37℃ 200r 振荡培养16h后。按1：100稀释，扩大培养至OD=0.4时，加IPTG（终浓度1mM）诱导4h，然后提取dsRNA。但是我做了几次就是没有表达出dsRNA，为什么呢？？？求指教！！！@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-19 21:56:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9440jizhu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chj8558 at 2017-04-23 21:53:53
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是 ...

您好，我最近也在做这个实验，也是出现同样的状况，请问您解决了吗，想跟您一起探讨一下，一起进步，谢谢。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2020-12-14 21:26:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

chj8558

新虫 (小有名气)
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是为什么经过酶消化就没有条带了哪？？！！！   小弟刚开始做RNAi，请教各位大神，望不吝赐教！！！
HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功！！
诱导HT115菌表达dsRNA检测.jpg
赞一下 回复此楼
3楼2017-04-23 21:53:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rikku1518

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chj8558 at 2017-04-23 21:53:53
这是HT115（DE3）RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况，3、4和7、8诱导后没有用酶消化的，5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了，可是 ...

请问楼主最后找到原因了吗？
赞一下 回复此楼
4楼2018-07-23 15:17:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西区五号楼

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rikku1518 at 2018-07-23 15:17:21
请问楼主最后找到原因了吗？...

你好，我最近打算做昆虫的RNA干扰，想用大肠杆菌表达。但是在看文献的过程中，看到了表达载体是pET-2p，文献中说是由pET-30（a）+改造得来的，查了好多也没有看到具体的改造方法；还有用到的感受态是HT115菌株（RNA酶III缺失的BL21），这个感受态是可以购买吗？可以交流一下吗？
赞一下 回复此楼
5楼2018-10-25 10:06:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 申博自荐 +4 Linxia林夏 2026-04-13 4/200 2026-04-19 19:55 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 6/300 2026-04-19 13:00 by Aaron_zyn
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +12 刘墨墨 2026-04-13 12/600 2026-04-18 23:31 by 路病情
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭