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chj8558

新虫 (小有名气)

[求助] HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功!! 已有2人参与

我挑取HT115(DE3)(重组L4440)单克隆于LB液体培养基,37℃ 200r 振荡培养16h后。按1:100稀释,扩大培养至OD=0.4时,加IPTG(终浓度1mM)诱导4h,然后提取dsRNA。但是我做了几次就是没有表达出dsRNA,为什么呢???求指教!!!@biostar2009
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偶尔小情调

新虫 (初入文坛)

请问你的问题解决了吗?
7楼2021-08-01 10:40:15
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chj8558

新虫 (小有名气)

这是HT115(DE3)RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况,3、4和7、8诱导后没有用酶消化的,5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了,可是为什么经过酶消化就没有条带了哪??!!!   小弟刚开始做RNAi,请教各位大神,望不吝赐教!!!
HT115(DE3)菌表达dsRNA不成功!!
诱导HT115菌表达dsRNA检测.jpg

3楼2017-04-23 21:53:53
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rikku1518

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chj8558 at 2017-04-23 21:53:53
这是HT115(DE3)RNA电泳图谱。2和6是IPTG诱导后提取的RNA经DNase I和RNase A消化后的情况,3、4和7、8诱导后没有用酶消化的,5和9是没有诱导的。我的目的dsRNA大小比600bp一些。从3、4和7、8看好像诱导出来了,可是 ...

请问楼主最后找到原因了吗?
4楼2018-07-23 15:17:21
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rikku1518 at 2018-07-23 15:17:21
请问楼主最后找到原因了吗?...

你好,我最近打算做昆虫的RNA干扰,想用大肠杆菌表达。但是在看文献的过程中,看到了表达载体是pET-2p,文献中说是由pET-30(a)+改造得来的,查了好多也没有看到具体的改造方法;还有用到的感受态是HT115菌株(RNA酶III缺失的BL21),这个感受态是可以购买吗?可以交流一下吗?
5楼2018-10-25 10:06:28
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