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反对派银虫 (正式写手)
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快酶切8小时的异常现象求助 已有1人参与
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本人用TAKARA的快酶切对pET-28a(分子量5369 bp)进行三种方式的酶切，酶切时间均为8小时。得到如下结果，很不解，请问问题出在哪里？ 从左至右依次为 泳道1. 5微升（约0.5μg）质粒空质粒pET-28a，不酶切（对照）； 泳道2. 空孔（破了未上样）； 泳道3. 5微升（约0.5μg）质粒pET-28a, 1微升 BamH I ， 1微升buffer，3微升水单酶切； 泳道4. 20微升（约2.5 μg）质粒pET-28a，Nde I、Xho I 各4微升，buffer 8微升，水44微升； 泳道5. Supercoiled Marker(超螺旋DNA marker) 泳道6. 15微升（约1.5 μg）质粒pET-28a， BamH I 、Xho I 各4微升，buffer 8微升，水49微升. 酶切温度为37℃，酶切体系没有错。 我的疑问：酶切（不管是双酶切，还是单酶切）后，质粒变为线状，电泳的速度比超螺旋的空质粒慢，现在刚好相反（比超螺旋DNA要快很多），是什么原因？ 是快酶不能长时间切吗？ 还是公司卖给我的酶有问题（以前用fermentas的快酶酶切的时候从未出现这种问题）？ 恳请有经验的同行指教！  快酶酶切8小时异常现象.jpg |
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