应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » BiFc载体构建
61/1返回列表
查看: 6149  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小菜搞研究

新虫 (初入文坛)

[求助] BiFc载体构建 已有1人参与

小新最近在做BiFc载体的构建，将目的片段设计成含有XbaI和KpnI的片段后，将SpYCEM-150和SpYNE-150各自用双酶切（时间试过30分和45分、1h）后，同源重组，（载体和片段的比例试过2:5，4:3），然后正常的转化大肠杆菌（也换过感受态细胞），现在有三个N段的载体构好了，N段还有两个，但最重要的C段的载体怎么弄都没弄出来，没弄出来的这几个转化时挑单克隆几乎没有、郁闷了，希望各位前辈多多帮忙一下，谢谢谢谢

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-02 05:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小菜搞研究

新虫 (初入文坛)
载体大概10K以上，片段是500-1000，质粒双酶切后用的是切胶回收（师姐强烈嘱咐的），我也不知道为什么，今年研一所以特别懵逼

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-04-02 05:22:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么牌子的同源重组酶，你的酶是不是效率不行。
赞一下 回复此楼
与人玫瑰手有余香
3楼2017-04-02 21:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小菜搞研究

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 路人甲007 at 2017-04-02 21:36:04
用的什么牌子的同源重组酶，你的酶是不是效率不行。

之前三个N端的载体都是用酶CE ||同源重组的，好像是takara还是trans的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-04-03 00:20:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫辈

新虫 (初入文坛)
现在做出来吗

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2018-08-27 09:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouzhou7614

新虫 (初入文坛)
想问一下，最后做出来了吗？我现在也在构建这个载体，两端的都连不上，求助
赞一下 回复此楼
6楼2018-10-14 22:26:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小菜搞研究 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 0805 316求调剂 +6 大雪深藏 2026-03-18 6/300 2026-03-24 22:13 by peike
[考研] 086003食品工程求调剂 +5 淼淼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 20:53 by lailaisimei
[考研] 289求调剂 +8 硕星赴 2026-03-23 8/400 2026-03-24 20:17 by peike
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭