应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » BiFc载体构建
51/1返回列表
查看: 6148  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小菜搞研究

新虫 (初入文坛)

[求助] BiFc载体构建 已有1人参与

小新最近在做BiFc载体的构建，将目的片段设计成含有XbaI和KpnI的片段后，将SpYCEM-150和SpYNE-150各自用双酶切（时间试过30分和45分、1h）后，同源重组，（载体和片段的比例试过2:5，4:3），然后正常的转化大肠杆菌（也换过感受态细胞），现在有三个N段的载体构好了，N段还有两个，但最重要的C段的载体怎么弄都没弄出来，没弄出来的这几个转化时挑单克隆几乎没有、郁闷了，希望各位前辈多多帮忙一下，谢谢谢谢

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-02 05:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么牌子的同源重组酶，你的酶是不是效率不行。
赞一下 回复此楼
与人玫瑰手有余香
3楼2017-04-02 21:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

小菜搞研究

新虫 (初入文坛)
载体大概10K以上，片段是500-1000，质粒双酶切后用的是切胶回收（师姐强烈嘱咐的），我也不知道为什么，今年研一所以特别懵逼

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-04-02 05:22:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小菜搞研究

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 路人甲007 at 2017-04-02 21:36:04
用的什么牌子的同源重组酶，你的酶是不是效率不行。

之前三个N端的载体都是用酶CE ||同源重组的，好像是takara还是trans的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-04-03 00:20:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫辈

新虫 (初入文坛)
现在做出来吗

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2018-08-27 09:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 5/250 2026-03-25 00:20 by 元夕元
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:46 by zhouxuan..
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +7 holy J 2026-03-21 7/350 2026-03-24 17:24 by xiaohai104
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 316求调剂 +7 梁茜雯 2026-03-19 7/350 2026-03-23 16:21 by lingjue
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭