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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » BiFc载体构建
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小菜搞研究

新虫 (初入文坛)

[求助] BiFc载体构建 已有1人参与

小新最近在做BiFc载体的构建，将目的片段设计成含有XbaI和KpnI的片段后，将SpYCEM-150和SpYNE-150各自用双酶切（时间试过30分和45分、1h）后，同源重组，（载体和片段的比例试过2:5，4:3），然后正常的转化大肠杆菌（也换过感受态细胞），现在有三个N段的载体构好了，N段还有两个，但最重要的C段的载体怎么弄都没弄出来，没弄出来的这几个转化时挑单克隆几乎没有、郁闷了，希望各位前辈多多帮忙一下，谢谢谢谢

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1楼 2017-04-02 05:19:08
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小菜搞研究

新虫 (初入文坛)
载体大概10K以上，片段是500-1000，质粒双酶切后用的是切胶回收（师姐强烈嘱咐的），我也不知道为什么，今年研一所以特别懵逼

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2楼2017-04-02 05:22:36
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么牌子的同源重组酶，你的酶是不是效率不行。
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与人玫瑰手有余香
3楼2017-04-02 21:36:04
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小菜搞研究

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 路人甲007 at 2017-04-02 21:36:04
用的什么牌子的同源重组酶，你的酶是不是效率不行。

之前三个N端的载体都是用酶CE ||同源重组的，好像是takara还是trans的

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4楼2017-04-03 00:20:20
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虫虫辈

新虫 (初入文坛)
现在做出来吗

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5楼2018-08-27 09:39:39
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zhouzhou7614

新虫 (初入文坛)
想问一下，最后做出来了吗？我现在也在构建这个载体，两端的都连不上，求助
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6楼2018-10-14 22:26:09
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