| 查看: 23285 | 回复: 34 | |||
[求助]
求助诸君，新手TRIzol法提取RNA，RNA浓度太低，纯度也太低，怎么破 已有4人参与
|
|||
|
步骤： 1、细胞或组织加 Trizol 后，室温放置 5min，使其充分裂解。 2、12,000rpm 离心 10min，弃沉淀。 3、按 200ul 氯仿/ml Trizol 加入氯仿，上下颠倒混匀后常温放置15min。 4、4℃ 12,000g 离心 15min。 5、吸取上层水相，至另一离心管中 6、按 0.5ml 异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置10min。 7、4℃ 12,000g 离心 10min，弃上清，RNA 沉于管底。 8、按 1ml 75%乙醇/ml Trizol 加入 75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。（先加无酶水再加乙醇配置而成，会不会有问题？） 9、 4℃ 8,000g 离心 5min，尽量弃上清。 10、室温晾干或真空干燥 5-10min。注：RNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解。 11、用 10ul DEPC水溶解RNA样品。 其中我最后一步用10ul的DEPC水溶解，得到的RNA浓度才90多点ng/ul 浓度也不高，求助诸君啊啊啊  E0F478D859AE9A00BB4343FCC9FF71EF.jpg  E8B6ACCA6880FBD84EC6478AE9E3EE9A.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有124人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
feilr
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2794.7
- 散金: 586
- 红花: 3
- 沙发: 1
- 帖子: 579
- 在线: 267.2小时
- 虫号: 859481
- 注册: 2009-09-29
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:45:52
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:45:52
|
我们操作没有你的第二步，然后加水溶解是水会先预热到60度，或者60度孵育两分钟帮助溶解，其他步骤差不多，希望对你有帮助 发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
DTCZ16楼2017-04-01 07:07:25
zhouxiaohan
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1434.5
- 散金: 519
- 红花: 1
- 帖子: 810
- 在线: 189.5小时
- 虫号: 1210540
- 注册: 2011-02-23
- 专业: 医学光子学、光谱与光学成
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:44:58
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:44:58
|
我之前提的都是细胞的，异丙醇离心后如无明显沉淀，说明RNA量很少，你可以提高下你的菌量再试一下。另外，你的260/280值太低，我觉得有可能降解了。 发自小木虫Android客户端 |
14楼2017-03-31 22:29:52
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:45:28
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:45:28
|
RNA易降解，尽量不要放在常温，放在冰上。另外，异丙醇沉淀的时候，我们实验室是放在-20℃的。 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
15楼2017-04-01 01:29:46
yun920228
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 7784.5
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 274
- 在线: 33.4小时
- 虫号: 2633114
- 注册: 2013-09-03
- 性别: MM
- 专业: 食品加工技术
17楼2017-04-01 07:28:26
mochenmi
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1504.3
- 散金: 29
- 帖子: 221
- 在线: 48.7小时
- 虫号: 1966704
- 注册: 2012-09-01
- 专业: 植物病理学
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:44:35
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:44:35
|
有两个问题，第一个是加完异丙醇后离心是否看到明显沉淀？如果有看到沉淀说明rna量是比较多的。第二个是你测浓度的数据中，260/280才1.23，应该是2.0左右，这也可能导致浓度的数据不对。你再重新测一下，如果还是1.23左右，考虑跑个胶看是否降解吧。 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2017-03-30 23:39:46
mengfanbo
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3314.6
- 散金: 614
- 帖子: 873
- 在线: 128.5小时
- 虫号: 1447294
- 注册: 2011-10-17
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-02 08:33:58
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-02 08:33:58
|
我们的方法：第5步之后先加2ul糖原混匀，再进行第6步。第6步里的室温改成-20度静置半小时后再进行下一步。 发自小木虫IOS客户端 |
18楼2017-04-01 07:52:08
21楼2017-04-01 20:07:13
25楼2017-04-02 09:30:46
|
1.我除了离心以外都是常温操作，有没有问题？哪些是最好冰上操作？2.我后续又通过试剂盒纯化，但浓度变特别低，各位大佬用TRIzol提细菌RNA有没有纯化？3.我的步骤里面有没有哪个顺序不太合适或者时间不合适？ 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-03-30 19:55:23
cuijiaqi_92
铜虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 148.4
- 帖子: 77
- 在线: 94.1小时
- 虫号: 4913157
- 注册: 2016-08-12
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2017-03-30 20:35:59
4楼2017-03-30 20:51:57
liyuan110188
新虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 559.8
- 散金: 10
- 帖子: 46
- 在线: 10.8小时
- 虫号: 4510447
- 注册: 2016-03-16
- 专业: 细胞生物学
5楼2017-03-30 20:52:13
liyuan110188
新虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 559.8
- 散金: 10
- 帖子: 46
- 在线: 10.8小时
- 虫号: 4510447
- 注册: 2016-03-16
- 专业: 细胞生物学
6楼2017-03-30 21:29:59
8楼2017-03-31 12:58:14
9楼2017-03-31 12:59:20
10楼2017-03-31 13:01:06
30
投票:
