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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助诸君，新手TRIzol法提取RNA，RNA浓度太低，纯度也太低，怎么破
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wangxiao318

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by DTCZ at 2017-03-31 13:01:06
没有看到明显沉淀，是不是可能因为我的样品稀释了一下？我OD600测的是0.487的样子，然后又稀释了100倍...

你的你的菌体是如何收集的，有没有看到菌体？看数值，菌体量好像不高。

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11楼2017-03-31 17:22:24
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
引用回帖:
2楼: Originally posted by DTCZ at 2017-03-30 22:55:23
1.我除了离心以外都是常温操作，有没有问题？哪些是最好冰上操作？2.我后续又通过试剂盒纯化，但浓度变特别低，各位大佬用TRIzol提细菌RNA有没有纯化？3.我的步骤里面有没有哪个顺序不太合适或者时间不合适？
...

RNA沉淀是什么颜色的呀？

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12楼2017-03-31 21:53:53
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
我提取真菌的RNA，提了好多次，5S端弥散好严重。来来来，咱们可以交流一下呀

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13楼2017-03-31 21:55:44
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zhouxiaohan

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:44:58
我之前提的都是细胞的，异丙醇离心后如无明显沉淀，说明RNA量很少，你可以提高下你的菌量再试一下。另外，你的260/280值太低，我觉得有可能降解了。

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14楼2017-03-31 22:29:52
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蜜蜡鱼

银虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:45:28
RNA易降解，尽量不要放在常温，放在冰上。另外，异丙醇沉淀的时候，我们实验室是放在-20℃的。

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DTCZ
15楼2017-04-01 01:29:46
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feilr

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:45:52
我们操作没有你的第二步，然后加水溶解是水会先预热到60度，或者60度孵育两分钟帮助溶解，其他步骤差不多，希望对你有帮助

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DTCZ
16楼2017-04-01 07:07:25
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yun920228

铁杆木虫 (小有名气)
我们提rna用的是试剂盒，最后加的是RNA溶解液，然后55℃左右温育10分钟

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17楼2017-04-01 07:28:26
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mengfanbo

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-02 08:33:58
我们的方法：第5步之后先加2ul糖原混匀，再进行第6步。第6步里的室温改成-20度静置半小时后再进行下一步。

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18楼2017-04-01 07:52:08
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houchenxi

金虫 (初入文坛)
RNA量少是不是因为组织或者细胞的量太少？

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以诚感人者，人亦诚以应。
19楼2017-04-01 10:36:00
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DTCZ

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by feilr at 2017-04-01 07:07:25
我们操作没有你的第二步，然后加水溶解是水会先预热到60度，或者60度孵育两分钟帮助溶解，其他步骤差不多，希望对你有帮助

感谢

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20楼2017-04-01 17:43:48
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