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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

你裂解的时候可以用移液枪吹打或者组织研磨器破碎,用液氮冷冻,所有的过程都在4度进行,异丙醇和吸取的上清等体积。

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31楼2017-04-14 15:52:46
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DTCZ

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-03-31 21:55:44
我提取真菌的RNA,提了好多次,5S端弥散好严重。来来来,咱们可以交流一下呀

我提的细菌的,现在浓度提高到了400+~600+,甚至还有900+,但纯度不太好,DNA量有点高,所以我后续用试剂盒纯化一道,就可以用了

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32楼2017-04-18 11:24:26
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LIFERESET

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1.取1.5ml Eppendorf离心管,加入1ml Trizol试剂(试剂需4℃保存)和2颗机械破碎用珠子,置于冰上备用;
2.取适量组织(<10mg)加入步骤1 Eppendorf离心管中;
3.机械破碎组织(仪器名及设定);
4.室温静置3~5min;
5.加入200ul氯仿,振荡混匀,使用Vortex需混匀15s;
6.室温静置3min;
7.4℃,12000rpm离心15min;
8.转移上清(约450~470ul)至新的Eppendorf离心管中;
9.加入0.7~1倍体积的异丙醇,手动上下颠倒混匀10~15次;
10.-20℃静置30~60min;
11.4℃,12000rpm离心10min,弃上清;
12.用75%乙醇(需用DEPC水配制,现用现配)500ul清洗两次,12000rpm离心5min,弃上清;
13.置于生物安全柜内晾干(至白色沉淀透明);
14.加入25~50ul DEPC水溶解RNA;
15.85℃加热3min;
16.-80℃保存。
这是我的提取方法,不过需要用匀浆仪,一般都能到200以上的浓度
33楼2017-04-18 14:12:19
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LD_273K

新虫 (初入文坛)

溶到无酶水后没有经过第15步加热就放-80了、会不会有影响?

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34楼2017-04-24 23:53:36
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LD_273K

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
33楼: Originally posted by LIFERESET at 2017-04-18 14:12:19
1.取1.5ml Eppendorf离心管,加入1ml Trizol试剂(试剂需4℃保存)和2颗机械破碎用珠子,置于冰上备用;
2.取适量组织(<10mg)加入步骤1 Eppendorf离心管中;
3.机械破碎组织(仪器名及设定);
4.室温静置3~5 ...

溶到无酶水后没有经过第15步加热就放-80了、会不会有影响?

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35楼2017-04-24 23:54:04
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