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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助诸君，新手TRIzol法提取RNA，RNA浓度太低，纯度也太低，怎么破
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
你裂解的时候可以用移液枪吹打或者组织研磨器破碎，用液氮冷冻，所有的过程都在4度进行，异丙醇和吸取的上清等体积。

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31楼2017-04-14 15:52:46
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DTCZ

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-03-31 21:55:44
我提取真菌的RNA，提了好多次，5S端弥散好严重。来来来，咱们可以交流一下呀

我提的细菌的，现在浓度提高到了400+～600+，甚至还有900+，但纯度不太好，DNA量有点高，所以我后续用试剂盒纯化一道，就可以用了

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32楼2017-04-18 11:24:26
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LIFERESET

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1.取1.5ml Eppendorf离心管，加入1ml Trizol试剂（试剂需4℃保存）和2颗机械破碎用珠子，置于冰上备用；
2.取适量组织（＜10mg）加入步骤1 Eppendorf离心管中；
3.机械破碎组织（仪器名及设定）；
4.室温静置3~5min；
5.加入200ul氯仿，振荡混匀，使用Vortex需混匀15s；
6.室温静置3min；
7.4℃，12000rpm离心15min；
8.转移上清（约450~470ul）至新的Eppendorf离心管中；
9.加入0.7~1倍体积的异丙醇，手动上下颠倒混匀10~15次；
10.-20℃静置30~60min；
11.4℃，12000rpm离心10min，弃上清；
12.用75%乙醇（需用DEPC水配制，现用现配）500ul清洗两次，12000rpm离心5min，弃上清；
13.置于生物安全柜内晾干（至白色沉淀透明）；
14.加入25~50ul DEPC水溶解RNA；
15.85℃加热3min；
16.-80℃保存。
这是我的提取方法，不过需要用匀浆仪，一般都能到200以上的浓度
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33楼2017-04-18 14:12:19
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LD_273K

新虫 (初入文坛)
溶到无酶水后没有经过第15步加热就放-80了、会不会有影响？

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34楼2017-04-24 23:53:36
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LD_273K

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
33楼: Originally posted by LIFERESET at 2017-04-18 14:12:19
1.取1.5ml Eppendorf离心管，加入1ml Trizol试剂（试剂需4℃保存）和2颗机械破碎用珠子，置于冰上备用；
2.取适量组织（＜10mg）加入步骤1 Eppendorf离心管中；
3.机械破碎组织（仪器名及设定）；
4.室温静置3~5 ...

溶到无酶水后没有经过第15步加热就放-80了、会不会有影响？

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35楼2017-04-24 23:54:04
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