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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助诸君，新手TRIzol法提取RNA，RNA浓度太低，纯度也太低，怎么破
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DTCZ

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助诸君，新手TRIzol法提取RNA，RNA浓度太低，纯度也太低，怎么破 已有4人参与

步骤：
1、细胞或组织加 Trizol 后，室温放置 5min，使其充分裂解。
2、12,000rpm 离心 10min，弃沉淀。
3、按 200ul 氯仿/ml Trizol 加入氯仿，上下颠倒混匀后常温放置15min。
4、4℃ 12,000g 离心 15min。
5、吸取上层水相，至另一离心管中
6、按 0.5ml 异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置10min。
7、4℃ 12,000g 离心 10min，弃上清，RNA 沉于管底。
8、按 1ml 75%乙醇/ml Trizol 加入 75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。（先加无酶水再加乙醇配置而成，会不会有问题？）
9、 4℃ 8,000g 离心 5min，尽量弃上清。
10、室温晾干或真空干燥 5-10min。注：RNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解。
11、用 10ul DEPC水溶解RNA样品。

其中我最后一步用10ul的DEPC水溶解，得到的RNA浓度才90多点ng/ul

浓度也不高，求助诸君啊啊啊

求助诸君，新手TRIzol法提取RNA，RNA浓度太低，纯度也太低，怎么破
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求助诸君，新手TRIzol法提取RNA，RNA浓度太低，纯度也太低，怎么破-1
E8B6ACCA6880FBD84EC6478AE9E3EE9A.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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1楼 2017-03-30 17:18:56
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LD_273K

新虫 (初入文坛)
溶到无酶水后没有经过第15步加热就放-80了、会不会有影响？

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34楼2017-04-24 23:53:36
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DTCZ

铜虫 (小有名气)
1.我除了离心以外都是常温操作，有没有问题？哪些是最好冰上操作？2.我后续又通过试剂盒纯化，但浓度变特别低，各位大佬用TRIzol提细菌RNA有没有纯化？3.我的步骤里面有没有哪个顺序不太合适或者时间不合适？

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2楼2017-03-30 19:55:23
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臭皮匠

新虫 (初入文坛)
可以考虑试剂盒提取
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4楼2017-03-30 20:51:57
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liyuan110188

新虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2017-03-30 22:39:42
引用回帖:
2楼: Originally posted by DTCZ at 2017-03-30 19:55:23
1.我除了离心以外都是常温操作，有没有问题？哪些是最好冰上操作？2.我后续又通过试剂盒纯化，但浓度变特别低，各位大佬用TRIzol提细菌RNA有没有纯化？3.我的步骤里面有没有哪个顺序不太合适或者时间不合适？
...

我也是想问，哎，跟你出现了一样的问题

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5楼2017-03-30 20:52:13
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