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mmqlhy

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段基因连接,转化问题已有4人参与

我想把一个6.5kb的片段倒入4.7kb的载体中,insert 是从一个质粒上切下来的,保证有相同的酶切位点,连接体系试过1:1,2:1, 3:1,热激,都不成功,已经做了快俩月了,求大神帮忙!

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borrysa

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by mmqlhy at 2017-03-23 02:42:13
之前试过电转,做过阳性对照,转化效率没有热转高,大部分情况是板子上什么也没长
...

试试减少载体的量,加CIAP 处理。
试试5:1体系,连接过夜。

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8楼2017-03-23 09:08:32
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)

2楼2017-03-22 23:44:45
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)

是不长菌,还是都是假阳性?

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3楼2017-03-22 23:45:21
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-22 23:44:45
怎么个不成功法?

有过两次假阳性,其余几次都是不长菌

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4楼2017-03-23 01:40:12
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