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514706098

新虫 (初入文坛)

[交流] 问下大家现在还用不用蓝白筛选了? 已有11人参与

现在载体克隆的技术是越来越成熟了。最初大家喜欢用蓝白筛来进行鉴定假阳性,但最近的话就很少见实验室用这个方法了。我觉得其中原因有:1.即使是白斑假阳性也很高;2.xgal和iptg成本较高;3菌落PCR比蓝白筛选更方便
而且自从引进了同源重组连接技术后,我们实验室的人在做原核克隆表达时甚至都直接跳过了T载体克隆,直接连于表达载体进行测序、保存等步骤。
我想问下大家的实验室现在的蓝白筛选是不是也不常用了??你们觉得原因有哪些?

谢谢
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gyesang

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蓝白斑筛选属于中间步骤,浪费时间

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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2017-03-14 12:38:52
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无知的小强

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
全式金的那个载体很好用,假阳性少

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Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.
9楼2017-03-15 11:53:42
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陪你砸流星

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接菌落pcr,电泳检测就行了

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3楼2017-03-14 14:19:17
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普通回帖

渭城朝风

新虫 (初入文坛)

不再那么用了
希望大家互相学习互相交流
4楼2017-03-14 15:08:57
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
觉得麻烦,现在PCR酶也便宜,随便买管便宜的Taq酶做菌落PCR也挺快
5楼2017-03-14 23:29:18
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彭江容

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接菌落pcr就是不涂xgal和iptg来筛选然后菌落pcr,是吗?这样的话假阳性也非常高啊,还有能给我讲讲那种新技术吗?最近在做克隆,不太顺利。

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6楼2017-03-14 23:42:02
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

···
7楼2017-03-14 23:46:47
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林夕boss

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
就我目前的经历,用相应的引物做菌落pcr效果还是可以的

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8楼2017-03-15 11:27:58
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514706098

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 彭江容 at 2017-03-14 23:42:02
直接菌落pcr就是不涂xgal和iptg来筛选然后菌落pcr,是吗?这样的话假阳性也非常高啊,还有能给我讲讲那种新技术吗?最近在做克隆,不太顺利。

如果操作都正确而且载体没问题的话,我们做T载体克隆效率都是非常高的。不用蓝白筛,直接菌落PCR,挑8中7
重组连接。。。网上其实有很多了,各生物公司也有试剂提供——效率比T4高,假阳性更低。虽然贵点,但是可以避免失败,中间很多可以直接使用PCR产物或者酶切产物,不用回收,省时省力
10楼2017-03-16 00:08:51
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