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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 问下大家现在还用不用蓝白筛选了？
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514706098

新虫 (初入文坛)

[交流] 问下大家现在还用不用蓝白筛选了？ 已有11人参与

现在载体克隆的技术是越来越成熟了。最初大家喜欢用蓝白筛来进行鉴定假阳性，但最近的话就很少见实验室用这个方法了。我觉得其中原因有：1.即使是白斑假阳性也很高；2.xgal和iptg成本较高；3菌落PCR比蓝白筛选更方便
而且自从引进了同源重组连接技术后，我们实验室的人在做原核克隆表达时甚至都直接跳过了T载体克隆，直接连于表达载体进行测序、保存等步骤。
我想问下大家的实验室现在的蓝白筛选是不是也不常用了？？你们觉得原因有哪些？

谢谢
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1楼 2017-03-14 11:21:40
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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蓝白斑筛选属于中间步骤，浪费时间

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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2017-03-14 12:38:52
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无知的小强

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
全式金的那个载体很好用，假阳性少

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Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.
9楼2017-03-15 11:53:42
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陪你砸流星

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接菌落pcr，电泳检测就行了

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3楼2017-03-14 14:19:17
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普通回帖

渭城朝风

新虫 (初入文坛)
不再那么用了
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希望大家互相学习互相交流
4楼2017-03-14 15:08:57
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
觉得麻烦，现在PCR酶也便宜，随便买管便宜的Taq酶做菌落PCR也挺快
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5楼2017-03-14 23:29:18
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彭江容

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接菌落pcr就是不涂xgal和iptg来筛选然后菌落pcr，是吗？这样的话假阳性也非常高啊，还有能给我讲讲那种新技术吗？最近在做克隆，不太顺利。

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6楼2017-03-14 23:42:02
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
不用了

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···
7楼2017-03-14 23:46:47
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林夕boss

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
就我目前的经历，用相应的引物做菌落pcr效果还是可以的

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8楼2017-03-15 11:27:58
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514706098

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 彭江容 at 2017-03-14 23:42:02
直接菌落pcr就是不涂xgal和iptg来筛选然后菌落pcr，是吗？这样的话假阳性也非常高啊，还有能给我讲讲那种新技术吗？最近在做克隆，不太顺利。

如果操作都正确而且载体没问题的话，我们做T载体克隆效率都是非常高的。不用蓝白筛，直接菌落PCR，挑8中7
重组连接。。。网上其实有很多了，各生物公司也有试剂提供——效率比T4高，假阳性更低。虽然贵点，但是可以避免失败，中间很多可以直接使用PCR产物或者酶切产物，不用回收，省时省力
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10楼2017-03-16 00:08:51
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