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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切重组质粒后电泳条带是糊的
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爱折腾的YJ

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切重组质粒后电泳条带是糊的 已有3人参与

puc19重组质粒酶切后为什么长这样，应该是两条带的呀。
用BAMHI切的

酶切重组质粒后电泳条带是糊的
pUC19重组质粒酶切.JPG
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1楼 2017-03-10 12:41:09
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉是胶跑得不好，你再跑一次。然后还有问题就看是不是酶切不完全

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2017-03-10 13:22:50
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爱折腾的YJ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-03-10 13:22:50
感觉是胶跑得不好，你再跑一次。然后还有问题就看是不是酶切不完全

这是切过头了吧 照理说只有两条带而已
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3楼2017-03-11 13:13:54
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱折腾的YJ at 2017-03-11 13:13:54
这是切过头了吧 照理说只有两条带而已...

你的质粒多大？ladder label一下。bamh1切完应该多大？

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2017-03-11 14:51:36
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-13 07:43:28
如果单纯是酶切验证的话，质粒浓度没必要这么高，会有酶切不完全现象。不知道你的目的条带大小是多少，你确定这个重组载体已经构建成功了么？上面是否连有你的目的基因呢？如果你酶切的目的就是验证，那有可能是构建失败了。另外电泳图参数可以调整一下，尽量拿到漂亮的结果。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
5楼2017-03-11 22:19:34
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑个未酶切质粒，可能是质粒提的不好
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6楼2017-03-12 21:20:15
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-13 07:43:55
首先，质粒和酶切产物一起跑个胶，对比一下。至于bamhi酶切形成该条带，这有可能是酶切时间不够，我平时都是酶切3-8h。若，仅仅用用于检测，2h就可以。

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付出定有回报
7楼2017-03-13 01:00:25
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爱折腾的YJ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-03-11 22:19:34
如果单纯是酶切验证的话，质粒浓度没必要这么高，会有酶切不完全现象。不知道你的目的条带大小是多少，你确定这个重组载体已经构建成功了么？上面是否连有你的目的基因呢？如果你酶切的目的就是验证，那有可能是构建 ...

是构建成功的，我将2000-6000的基因组插进puc19，现在打算把它切下来插入pet28a表达。之前验证有插上去，现在想回收这个目的基因却没有了。
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8楼2017-03-13 15:00:49
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