| 查看: 7211 | 回复: 7 | ||
[求助]
急求助，融合PCR融合不出的问题 已有1人参与
|
|
同源敲除，左臂1000bp左右，右臂850bp，抗性片段2100bp。左臂的下游引物与抗性片段上游引物；右臂的上游引物与抗性片段的下游引物有互补部分。 用的Es Taq酶，摩尔比 左臂：抗性片段：右臂=1：3：1，20μl体系 94℃ 5min 94℃ 30s 58℃ 30s 72℃ 2min10s 30cycle 第一次碰上融合不上的情况，求大神  |
回复此楼» 猜你喜欢
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有105人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
badronger
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 27.8
- 散金: 10
- 帖子: 10
- 在线: 9.5小时
- 虫号: 4416665
- 注册: 2016-02-19
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-10 07:40:56
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-10 07:40:56
|
三个片段的添加比例是根据摩尔浓度来的，不知道你是怎么确定的，然后融合是需要两步pcr的，第一步不添加引物，循环十几次，第二次pcr 只添加引物，再循环30左右，而且50微升体系会不会好一点，我是一直用50的，是为了胶回收浓度大一点。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-03-09 09:19:57
3楼2017-03-09 15:32:16
|
|
4楼2017-03-10 04:01:58
5楼2017-03-11 03:10:03
萌萌笑笑
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2289.2
- 散金: 2200
- 红花: 4
- 帖子: 857
- 在线: 141.2小时
- 虫号: 2146426
- 注册: 2012-11-25
- 性别: MM
- 专业: 植物学
6楼2017-03-25 16:28:13
萌萌笑笑
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2289.2
- 散金: 2200
- 红花: 4
- 帖子: 857
- 在线: 141.2小时
- 虫号: 2146426
- 注册: 2012-11-25
- 性别: MM
- 专业: 植物学
7楼2017-03-25 16:28:31
Davan2464
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 206.3
- 帖子: 22
- 在线: 8.8小时
- 虫号: 3401189
- 注册: 2014-09-05
- 性别: MM
- 专业: 兽医传染病学
8楼2017-05-19 12:22:05