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[求助]
急求助，融合PCR融合不出的问题 已有1人参与
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同源敲除，左臂1000bp左右，右臂850bp，抗性片段2100bp。左臂的下游引物与抗性片段上游引物；右臂的上游引物与抗性片段的下游引物有互补部分。 用的Es Taq酶，摩尔比 左臂：抗性片段：右臂=1：3：1，20μl体系 94℃ 5min 94℃ 30s 58℃ 30s 72℃ 2min10s 30cycle 第一次碰上融合不上的情况，求大神  |
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三个片段的添加比例是根据摩尔浓度来的，不知道你是怎么确定的，然后融合是需要两步pcr的，第一步不添加引物，循环十几次，第二次pcr 只添加引物，再循环30左右，而且50微升体系会不会好一点，我是一直用50的，是为了胶回收浓度大一点。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-03-09 09:19:57
3楼2017-03-09 15:32:16
piggyflym
专家顾问
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4楼2017-03-10 04:01:58
5楼2017-03-11 03:10:03
萌萌笑笑
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6楼2017-03-25 16:28:13
萌萌笑笑
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7楼2017-03-25 16:28:31
8楼2017-05-19 12:22:05
