| 查看: 7100 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
急求助，融合PCR融合不出的问题 已有1人参与
|
||
|
同源敲除，左臂1000bp左右，右臂850bp，抗性片段2100bp。左臂的下游引物与抗性片段上游引物；右臂的上游引物与抗性片段的下游引物有互补部分。 用的Es Taq酶，摩尔比 左臂：抗性片段：右臂=1：3：1，20μl体系 94℃ 5min 94℃ 30s 58℃ 30s 72℃ 2min10s 30cycle 第一次碰上融合不上的情况，求大神  |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有264人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
萌萌笑笑
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2289.2
- 散金: 2200
- 红花: 4
- 帖子: 857
- 在线: 141.2小时
- 虫号: 2146426
- 注册: 2012-11-25
- 性别: MM
- 专业: 植物学
6楼2017-03-25 16:28:13
badronger
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 27.8
- 散金: 10
- 帖子: 10
- 在线: 9.5小时
- 虫号: 4416665
- 注册: 2016-02-19
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-10 07:40:56
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-10 07:40:56
|
三个片段的添加比例是根据摩尔浓度来的，不知道你是怎么确定的，然后融合是需要两步pcr的，第一步不添加引物，循环十几次，第二次pcr 只添加引物，再循环30左右，而且50微升体系会不会好一点，我是一直用50的，是为了胶回收浓度大一点。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-03-09 09:19:57
3楼2017-03-09 15:32:16
5楼2017-03-11 03:10:03
