应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 请教质粒小提浓度低
51/1返回列表
查看: 8473  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

risic

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教质粒小提浓度低 已有3人参与

新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间          菌液量                洗脱              洗脱次数        质粒浓度
48h左右          2ml                80ul                2              10ng/ul
17h               3ml*2管合并        40ul         3              30ng/ul
16h               5ml*2管合并        50ul          3              20ng/ul
还要做测序和酶切，求教如何提升质粒浓度？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-03-07 19:34:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

risic

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-03-08 22:36:28
实验做实验？？？怎么不买个试剂盒的，试剂盒提取质粒就好了啊，不用烦。。。。再自己弄懂一下那些原理就好了...

我是用的试剂盒，原理也看过，就是提取效率不好
赞一下 回复此楼
9楼2017-03-09 19:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
risic: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2017-03-09 19:52:22
如果你的菌株和质粒不带氯霉素抗性，提质粒前加氯霉素处理2小时，可以提高质粒产量。实在不行就多准备一些菌，一次性提很多。提好的质粒在-20度可以保存很久。酶切好的质粒回收后冻起来也可以保存很久。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2017-03-07 23:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pansya

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
1楼: Originally posted by risic at 2017-03-07 19:34:12
新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间          菌液量                洗脱              洗脱次数        质粒浓度
48h左右          2ml                80ul                2              10ng/ul
17h           ...

请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-03-08 08:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是阿宝

金虫 (小有名气)
多培养阳性菌，小提质粒的话可以洗脱两次

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-03-08 09:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭