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risic

新虫 (初入文坛)

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[求助] 请教质粒小提浓度低已有3人参与

新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间    菌液量          洗脱       洗脱次数质粒浓度
48h左右    2ml          80ul          2       10ng/ul
17h          3ml*2管合并 40ul 3       30ng/ul
16h          5ml*2管合并 50ul    3       20ng/ul
还要做测序和酶切，求教如何提升质粒浓度？

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克隆活化小提质粒相关问题已经有4人回复

1楼 2017-03-07 19:34:12

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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
risic: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2017-03-09 19:52:22

如果你的菌株和质粒不带氯霉素抗性，提质粒前加氯霉素处理2小时，可以提高质粒产量。实在不行就多准备一些菌，一次性提很多。提好的质粒在-20度可以保存很久。酶切好的质粒回收后冻起来也可以保存很久。

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2楼2017-03-07 23:54:02

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pansya

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

引用回帖:

1楼: Originally posted by risic at 2017-03-07 19:34:12
新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间    菌液量          洗脱       洗脱次数质粒浓度
48h左右    2ml          80ul          2       10ng/ul
17h    ...

请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助

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3楼2017-03-08 08:01:26

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