24小时热门版块排行榜

返回列表

risic

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 10
帖子: 40
在线: 47.6小时
虫号: 4431682
注册: 2016-02-24
专业: 生态系统生态学

[求助] 请教质粒小提浓度低已有3人参与

新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间    菌液量          洗脱       洗脱次数质粒浓度
48h左右    2ml          80ul          2       10ng/ul
17h          3ml*2管合并 40ul 3       30ng/ul
16h          5ml*2管合并 50ul    3       20ng/ul
还要做测序和酶切，求教如何提升质粒浓度？

回复此楼

» 猜你喜欢

推荐一本书已经有12人回复
基金申报已经有4人回复
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂已经有4人回复
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？已经有9人回复
溴的反应液脱色已经有6人回复
纳米粒子粒径的测量已经有7人回复
常年博士招收(双一流，工科) 已经有4人回复
参与限项已经有5人回复
有没有人能给点建议已经有5人回复
假如你的研究生提出不合理要求已经有12人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

克隆活化小提质粒相关问题已经有4人回复

1楼 2017-03-07 19:34:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

应助: 41 (小学生)
金币: 3155.8
散金: 26
红花: 6
帖子: 899
在线: 95.8小时
虫号: 245021
注册: 2006-04-22
性别: GG
专业: 免疫生物学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
risic: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2017-03-09 19:52:22

如果你的菌株和质粒不带氯霉素抗性，提质粒前加氯霉素处理2小时，可以提高质粒产量。实在不行就多准备一些菌，一次性提很多。提好的质粒在-20度可以保存很久。酶切好的质粒回收后冻起来也可以保存很久。

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2017-03-07 23:54:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

pansya

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 18.4
红花: 2
帖子: 61
在线: 10.5小时
虫号: 5844375
注册: 2017-03-05
专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

引用回帖:

1楼: Originally posted by risic at 2017-03-07 19:34:12
新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间    菌液量          洗脱       洗脱次数质粒浓度
48h左右    2ml          80ul          2       10ng/ul
17h    ...

请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助

发自小木虫Android客户端

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2017-03-08 08:01:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖