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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 请教质粒小提浓度低
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risic

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教质粒小提浓度低 已有3人参与

新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间          菌液量                洗脱              洗脱次数        质粒浓度
48h左右          2ml                80ul                2              10ng/ul
17h               3ml*2管合并        40ul         3              30ng/ul
16h               5ml*2管合并        50ul          3              20ng/ul
还要做测序和酶切，求教如何提升质粒浓度？
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1楼 2017-03-07 19:34:12
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
risic: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2017-03-09 19:52:22
如果你的菌株和质粒不带氯霉素抗性，提质粒前加氯霉素处理2小时，可以提高质粒产量。实在不行就多准备一些菌，一次性提很多。提好的质粒在-20度可以保存很久。酶切好的质粒回收后冻起来也可以保存很久。
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2楼2017-03-07 23:54:02
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pansya

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
1楼: Originally posted by risic at 2017-03-07 19:34:12
新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间          菌液量                洗脱              洗脱次数        质粒浓度
48h左右          2ml                80ul                2              10ng/ul
17h           ...

请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助

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3楼2017-03-08 08:01:26
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我是阿宝

金虫 (小有名气)
多培养阳性菌，小提质粒的话可以洗脱两次

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4楼2017-03-08 09:52:51
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risic

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pansya at 2017-03-08 08:01:26
请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助
...

谢谢，再请问一下“将组合管活化一下”具体怎么做？刚入门不是很懂
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5楼2017-03-08 14:01:21
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huanhuanha

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
risic: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2017-03-11 20:50:28
是试剂盒提的吗？一般试剂盒提取浓度太低的话，可以改用手工提取。我的就是的，效果还不错。另外想说，加入的菌液量太多的话，好像结果浓度也不会提高太多，因为你加入的裂解液是固定的，一般加入1-5ml菌液
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6楼2017-03-08 14:22:18
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pansya

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
risic: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢，我去试一试 2017-03-08 19:33:21
引用回帖:
3楼: Originally posted by pansya at 2017-03-08 08:01:26
请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助
...

你可以试一下，希望可以帮到你。
请教质粒小提浓度低



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7楼2017-03-08 18:18:18
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2017-03-08 22:36:28
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risic

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-03-08 22:36:28
实验做实验？？？怎么不买个试剂盒的，试剂盒提取质粒就好了啊，不用烦。。。。再自己弄懂一下那些原理就好了...

我是用的试剂盒，原理也看过，就是提取效率不好
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9楼2017-03-09 19:51:51
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