应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 请教质粒小提浓度低
91/1返回列表
查看: 8815  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

risic

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教质粒小提浓度低 已有3人参与

新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间          菌液量                洗脱              洗脱次数        质粒浓度
48h左右          2ml                80ul                2              10ng/ul
17h               3ml*2管合并        40ul         3              30ng/ul
16h               5ml*2管合并        50ul          3              20ng/ul
还要做测序和酶切，求教如何提升质粒浓度？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-03-07 19:34:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
risic: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2017-03-09 19:52:22
如果你的菌株和质粒不带氯霉素抗性，提质粒前加氯霉素处理2小时，可以提高质粒产量。实在不行就多准备一些菌，一次性提很多。提好的质粒在-20度可以保存很久。酶切好的质粒回收后冻起来也可以保存很久。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2017-03-07 23:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pansya

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
1楼: Originally posted by risic at 2017-03-07 19:34:12
新手求助，质粒提取多次都只有20ng/ul左右，电泳几乎无条带。
几次小提过程和结果如下：
摇菌时间          菌液量                洗脱              洗脱次数        质粒浓度
48h左右          2ml                80ul                2              10ng/ul
17h           ...

请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-03-08 08:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是阿宝

金虫 (小有名气)
多培养阳性菌，小提质粒的话可以洗脱两次

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-03-08 09:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

risic

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pansya at 2017-03-08 08:01:26
请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助
...

谢谢，再请问一下“将组合管活化一下”具体怎么做？刚入门不是很懂
赞一下 回复此楼
5楼2017-03-08 14:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huanhuanha

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
risic: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2017-03-11 20:50:28
是试剂盒提的吗？一般试剂盒提取浓度太低的话，可以改用手工提取。我的就是的，效果还不错。另外想说，加入的菌液量太多的话，好像结果浓度也不会提高太多，因为你加入的裂解液是固定的，一般加入1-5ml菌液
赞一下 回复此楼
6楼2017-03-08 14:22:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pansya

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
risic: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢，我去试一试 2017-03-08 19:33:21
引用回帖:
3楼: Originally posted by pansya at 2017-03-08 08:01:26
请问你是用什么洗脱的？洗脱的时候可以将洗脱液换成3mol/l的NaoH。还有提质粒之前可以将组合管活化一下。希望对你有帮助
...

你可以试一下，希望可以帮到你。
请教质粒小提浓度低



发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-03-08 18:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2017-03-08 22:36:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

risic

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-03-08 22:36:28
实验做实验？？？怎么不买个试剂盒的，试剂盒提取质粒就好了啊，不用烦。。。。再自己弄懂一下那些原理就好了...

我是用的试剂盒，原理也看过，就是提取效率不好
赞一下 回复此楼
9楼2017-03-09 19:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 risic 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭