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蜗牛包子

铜虫 (小有名气)

[求助] PBI121质粒验证 已有2人参与

我从师兄哪里得了PBI121质粒,但是目的片段P出来的条带不对,一个引物是M13-F,另一个引物是同源臂和M13-R是一样的。结果P出来的条带是1000多,要的是9000多的。
我就觉得质粒可能有问题,进行了HindIII单酶切,和NheI、EcoRI双酶切。单酶切的Marker是15000,切出的条带感觉更接近10000的感觉;双酶切Marker是10000,结果应该是9000多的5000多,切出来也不对。
感觉是这个质粒有问题吧?请问各位有没有PBI121质粒,想求一枚~

PBI121质粒验证
IMG_4408.JPG
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蜗牛包子

铜虫 (小有名气)

还有两张酶切的图不知道怎么发上了
2楼2017-03-04 16:02:23
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蜗牛包子

铜虫 (小有名气)

是不是质粒太大不适合用酶切和酶连呢
3楼2017-03-04 16:06:06
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

9000多想扩出来,不是一般的难啊,我觉得质粒应该没问题,酶切加上你这么大的片段,电泳结果会有误差的,看的不是那么明显。质粒图谱有的话你把M-13上下游扩出来的产物拿去测序,然后比对一下就知道是不是你想要的了

发自小木虫Android客户端
4楼2017-03-04 17:01:34
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
蜗牛包子: 金币+1 2017-03-05 12:57:26
把质粒寄出去测个序就行了,这个问题得先解决,免得到后边发现不对,白忙活了
···
5楼2017-03-04 18:00:07
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heiye402

禁虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蜗牛包子: 金币+2, 有帮助 2017-03-05 12:52:11
本帖内容被屏蔽

6楼2017-03-04 19:17:23
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蜗牛包子

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by heiye402 at 2017-03-04 19:17:23
不知道你这个质粒原本大小是多大,如果很大的话凝胶电泳的胶的分辨率是有范围的,太大的片段就没办法进行大小判断了,你可以找个酶切位点多的酶进行酶切,然后把那些小片段全加起来,看看是不是和理想的一样,如果一 ...

14000多,嗯,我试试这个方法。谢谢
7楼2017-03-05 12:52:04
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蜗牛包子

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-04 17:01:34
9000多想扩出来,不是一般的难啊,我觉得质粒应该没问题,酶切加上你这么大的片段,电泳结果会有误差的,看的不是那么明显。质粒图谱有的话你把M-13上下游扩出来的产物拿去测序,然后比对一下就知道是不是你想要的了 ...

之前我反向扩另一个质粒,8000多成功了,我就想试下这个,结果很不理想。M13中间是我不想要的部分。
8楼2017-03-05 12:55:00
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