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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 小肽电泳相关问题
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浮生若茶520

铜虫 (小有名气)

[求助] 小肽电泳相关问题 已有3人参与

最近想跑Tricine-SDS-PAGE电泳，可是配的胶始终不凝固，是什么问题呢？会不会是因为我在配凝胶缓冲液和凝胶储存液的时候加过热啊？
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1楼 2017-03-02 11:09:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 浮生若茶520 at 2017-03-06 16:19:52
哦哦，还有一个问题就是染色液脱色液和样品缓冲液可以用一般的SDS-PAGE电泳用的那种吗...

染色脱色与普通电泳一样  只是在染色前最好用固定液固定10min
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12楼2017-03-14 08:35:04
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释然Ooo

新虫 (小有名气)
换新的APS试一下吧，可能是APS失效了。

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-03-02 21:20:12
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加热只是促进溶解  对你的配方不会有影响
APS要新鲜配制  
凝胶的过程可以将胶放于37℃条件下  这样凝的快一些
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3楼2017-03-03 08:38:16
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浮生若茶520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 释然Ooo at 2017-03-02 21:20:12
换新的APS试一下吧，可能是APS失效了。

APS就是新配的啊
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4楼2017-03-03 11:06:51
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浮生若茶520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-03-03 08:38:16
加热只是促进溶解  对你的配方不会有影响
APS要新鲜配制  
凝胶的过程可以将胶放于37℃条件下  这样凝的快一些

那些试剂加在一起不溶所以才加热的，对配方和凝胶没有影响吗？我用的30度加热
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5楼2017-03-03 11:10:03
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 浮生若茶520 at 2017-03-03 11:10:03
那些试剂加在一起不溶所以才加热的，对配方和凝胶没有影响吗？我用的30度加热...

哪些试剂？你是说配胶的组分试剂  还是说你配胶的时候各组分之间不容？
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6楼2017-03-03 16:14:18
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浮生若茶520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-03-03 16:14:18
哪些试剂？你是说配胶的组分试剂  还是说你配胶的时候各组分之间不容？...

配胶的组分试剂，比如电泳凝胶缓冲液按照配方配出来就不溶解，需要加热才能溶解
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7楼2017-03-06 10:56:45
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 浮生若茶520 at 2017-03-06 10:56:45
配胶的组分试剂，比如电泳凝胶缓冲液按照配方配出来就不溶解，需要加热才能溶解...

这没什么  不溶解只能是加热促溶  我都是这样配的
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8楼2017-03-06 11:46:31
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浮生若茶520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-03-06 11:46:31
这没什么  不溶解只能是加热促溶  我都是这样配的...

哦哦，还有一个问题就是染色液脱色液和样品缓冲液可以用一般的SDS-PAGE电泳用的那种吗
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9楼2017-03-06 16:19:52
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黎可遇likeyu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 浮生若茶520 at 2017-03-06 16:19:52
哦哦，还有一个问题就是染色液脱色液和样品缓冲液可以用一般的SDS-PAGE电泳用的那种吗...

我看的文献说用的不是一般的那种
“取出平板中的凝胶立即浸泡于固定液(50 %乙醇, 10 %冰乙酸)中固定1 h , 再将固定后的凝胶置于45 ℃的染色液(1 g·L-1考马斯亮蓝R-250 的25 %乙醇, 8 %冰乙酸)中浸泡15 ～ 30 min , 然后用蒸馏水将凝胶淋洗一次, 最后, 多次变换脱色液(25 %乙醇,8 %冰乙酸, 以上均为体积分数), 直至凝胶上背景脱净为止。”
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10楼2017-03-11 14:32:36
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