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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » SDS-PAGE电泳图：这是不是没有表达目标蛋白？
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圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE电泳图：这是不是没有表达目标蛋白？

本人用pET24a转了段基因进BL21，想表达一个蛋白，是43.5kDa的。加诱导剂后取上清跑电泳，结果如图，想请问各位前辈，这是不是代表没有表达出目标蛋白？摸索四个浓度，不加诱导剂为对照，分别诱导6h 和8h。第一次做这种实验，这是第一次跑，跑的其实很丑，把握不太好，还请大家多多 提提意见，我好以后优化

SDS-PAGE电泳图：这是不是没有表达目标蛋白？
IMG_20170223_105600_副本_副本.jpg


SDS-PAGE电泳图：这是不是没有表达目标蛋白？-1
IMG_20170223_105600_副本1.jpg
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1楼 2017-02-24 13:45:43
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匿名
本帖仅楼主可见
2楼2017-02-24 13:50:04
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gengxin60
祝福
3楼2017-02-24 13:51:23
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chlq314101a
祝福

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4楼2017-02-24 14:01:10
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qi7an

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+1, 因为想着反正包涵体表达也是不好的，最主要是上清有，就只做了上清 2017-02-24 15:09:25
应该是没有表达。为什么没有点包涵体的样品？有可能是包涵体表达呢？很久没做表达了。小木虫上一定有很多牛人。祝福。

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5楼2017-02-24 14:03:38
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cjqueen


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6楼2017-02-24 14:08:25
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13132551195

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+1, 好的，谢谢 2017-02-24 16:12:47
有很少吧。可能包含体表达了

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7楼2017-02-24 16:01:41
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+3, 好的，那一般沉淀要怎么处理？浓度一般用几个来试比较好？诱导时间又从什么时候开始收来跑电泳比较好，现在感觉好像0h，2h，这些时间没必要收来跑电泳 2017-02-28 09:27:56
无诱导剂浓度上样有点高，上清液和沉淀都要上样，目前看是没有表达或者表达量非常少。

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8楼2017-02-24 20:50:10
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小瓜子

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我最近也在做这个，遇到了同样的问题，请问您最后是怎么解决的呢？
我是煮完之后，用移液枪吸，液体很粘稠取吸不上来，就离心之后吸取了上清，结果跟你差不多。。。现在也是非常困惑，我是16度，过夜诱导的。
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9楼2017-03-16 15:57:36
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lws9930

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
SDS-PAGE看不出。可能有表达，只是量很少。做个Western blot看看就知道了。

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10楼2017-03-17 12:10:23
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