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圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE电泳图:这是不是没有表达目标蛋白?

本人用pET24a转了段基因进BL21,想表达一个蛋白,是43.5kDa的。加诱导剂后取上清跑电泳,结果如图,想请问各位前辈,这是不是代表没有表达出目标蛋白?摸索四个浓度,不加诱导剂为对照,分别诱导6h 和8h。第一次做这种实验,这是第一次跑,跑的其实很丑,把握不太好,还请大家多多 提提意见,我好以后优化

SDS-PAGE电泳图:这是不是没有表达目标蛋白?
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SDS-PAGE电泳图:这是不是没有表达目标蛋白?-1
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2楼2017-02-24 13:50:04
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祝福
3楼2017-02-24 13:51:23
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4楼2017-02-24 14:01:10
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qi7an

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+1, 因为想着反正包涵体表达也是不好的,最主要是上清有,就只做了上清 2017-02-24 15:09:25
应该是没有表达。为什么没有点包涵体的样品?有可能是包涵体表达呢?很久没做表达了。小木虫上一定有很多牛人。祝福。

发自小木虫Android客户端
5楼2017-02-24 14:03:38
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6楼2017-02-24 14:08:25
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13132551195

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+1, 好的,谢谢 2017-02-24 16:12:47
有很少吧。可能包含体表达了

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7楼2017-02-24 16:01:41
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
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圆加leaf: 金币+3, 好的,那一般沉淀要怎么处理?浓度一般用几个来试比较好?诱导时间又从什么时候开始收来跑电泳比较好,现在感觉好像0h,2h,这些时间没必要收来跑电泳 2017-02-28 09:27:56
无诱导剂浓度上样有点高,上清液和沉淀都要上样,目前看是没有表达或者表达量非常少。

发自小木虫IOS客户端
8楼2017-02-24 20:50:10
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小瓜子

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近也在做这个,遇到了同样的问题,请问您最后是怎么解决的呢?
我是煮完之后,用移液枪吸,液体很粘稠取吸不上来,就离心之后吸取了上清,结果跟你差不多。。。现在也是非常困惑,我是16度,过夜诱导的。
9楼2017-03-16 15:57:36
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lws9930

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
SDS-PAGE看不出。可能有表达,只是量很少。做个Western blot看看就知道了。

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-03-17 12:10:23
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