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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 基因核定位序列的确定
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

[求助] 基因核定位序列的确定 已有1人参与

各位虫友，首先祝大家新年快乐。新的一年还需要再接再厉，科研实力再上一层楼。小虫我正在做一个蛋白的功能研究，细胞本底水平的蛋白定位情况是核定位的，但是当我在该株细胞系中过表达该蛋白时就出现了明显的胞质定位，不知道这是怎么回事。请各位虫友指点迷津。下一步我想确定一下该蛋白的核定位信号，但是用了不同的在线软件分析之后都没有找到经典的核定位序列存在，所以在这种情况下我该怎么去分析其核定位序列？我的想法是通过截断实验，每一段200bp左右，连接到GFP蛋白上，转染细胞观察GFP的核定位情况，不知道这样可取不可取？或者截断之后连接Flag标签，通过IF观察Flag标签的核定位情况。不知道这两种方法是否可取。请各位虫友不亲赐教！在此谢过！
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1楼 2017-02-07 10:19:06
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
KEVIN_LOVE: 金币+6, ★有帮助 2017-02-07 10:56:36
连接GFP更方便后继实验，核定位信号一般在N端吧
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2楼2017-02-07 10:47:58
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-07 10:47:58
连接GFP更方便后继实验，核定位信号一般在N端吧

不知道截断200bp再连接GFP会不会达不到理想的效果，毕竟GFP也是600bp左右。如果截断的200bp里面包含NLS序列，200bp这么长会不会也影响其定位的执行呢
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3楼2017-02-07 10:58:44
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by KEVIN_LOVE at 2017-02-07 10:58:44
不知道截断200bp再连接GFP会不会达不到理想的效果，毕竟GFP也是600bp左右。如果截断的200bp里面包含NLS序列，200bp这么长会不会也影响其定位的执行呢...

没问题吧，比GFP大很多的蛋白也能进细胞核
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4楼2017-02-07 12:14:28
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-07 12:14:28
没问题吧，比GFP大很多的蛋白也能进细胞核...

但是全蛋白连接GFP的时候是胞质定位的
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5楼2017-02-07 17:05:25
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by KEVIN_LOVE at 2017-02-07 17:05:25
但是全蛋白连接GFP的时候是胞质定位的...

你用什么质粒表达，你确定是融合蛋白？
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6楼2017-02-07 17:26:45
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