24小时热门版块排行榜    

查看: 5481  |  回复: 5

KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

[求助] 基因核定位序列的确定 已有1人参与

各位虫友,首先祝大家新年快乐。新的一年还需要再接再厉,科研实力再上一层楼。小虫我正在做一个蛋白的功能研究,细胞本底水平的蛋白定位情况是核定位的,但是当我在该株细胞系中过表达该蛋白时就出现了明显的胞质定位,不知道这是怎么回事。请各位虫友指点迷津。下一步我想确定一下该蛋白的核定位信号,但是用了不同的在线软件分析之后都没有找到经典的核定位序列存在,所以在这种情况下我该怎么去分析其核定位序列?我的想法是通过截断实验,每一段200bp左右,连接到GFP蛋白上,转染细胞观察GFP的核定位情况,不知道这样可取不可取?或者截断之后连接Flag标签,通过IF观察Flag标签的核定位情况。不知道这两种方法是否可取。请各位虫友不亲赐教!在此谢过!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
KEVIN_LOVE: 金币+6, 有帮助 2017-02-07 10:56:36
连接GFP更方便后继实验,核定位信号一般在N端吧
2楼2017-02-07 10:47:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-07 10:47:58
连接GFP更方便后继实验,核定位信号一般在N端吧

不知道截断200bp再连接GFP会不会达不到理想的效果,毕竟GFP也是600bp左右。如果截断的200bp里面包含NLS序列,200bp这么长会不会也影响其定位的执行呢
3楼2017-02-07 10:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
3楼: Originally posted by KEVIN_LOVE at 2017-02-07 10:58:44
不知道截断200bp再连接GFP会不会达不到理想的效果,毕竟GFP也是600bp左右。如果截断的200bp里面包含NLS序列,200bp这么长会不会也影响其定位的执行呢...

没问题吧,比GFP大很多的蛋白也能进细胞核
4楼2017-02-07 12:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-07 12:14:28
没问题吧,比GFP大很多的蛋白也能进细胞核...

但是全蛋白连接GFP的时候是胞质定位的
5楼2017-02-07 17:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
5楼: Originally posted by KEVIN_LOVE at 2017-02-07 17:05:25
但是全蛋白连接GFP的时候是胞质定位的...

你用什么质粒表达,你确定是融合蛋白?
6楼2017-02-07 17:26:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 KEVIN_LOVE 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 材料277求调剂 +4 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 15:29 by fch1983
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见