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比较着急的问题，关于基因敲除的，请大神解答 已有3人参与
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附件是载体图谱，图谱中仅有两个酶切位点，分别是EcoRI和AgeI，我就是用双酶切后然后在这两个位点间插入shRNA,之后就是常规的步骤涂板挑单克隆啥的，最后做出来测序也没问题。 但是到病毒包装感染细胞后筛选就出问题了：图谱中可以看到，该载体含有puro抗性序列，我用puro筛选感染后的细胞，细胞无法存活，重复了很多遍，也让不同的人重复这一步，结果都一样。 请问大神们，到底哪里出问题了？  图片1.png@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
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