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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 比较着急的问题，关于基因敲除的，请大神解答
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观享世界

木虫 (小有名气)

[求助] 比较着急的问题，关于基因敲除的，请大神解答 已有3人参与

附件是载体图谱，图谱中仅有两个酶切位点，分别是EcoRI和AgeI，我就是用双酶切后然后在这两个位点间插入shRNA,之后就是常规的步骤涂板挑单克隆啥的，最后做出来测序也没问题。
但是到病毒包装感染细胞后筛选就出问题了：图谱中可以看到，该载体含有puro抗性序列，我用puro筛选感染后的细胞，细胞无法存活，重复了很多遍，也让不同的人重复这一步，结果都一样。
请问大神们，到底哪里出问题了？

比较着急的问题，关于基因敲除的，请大神解答
图片1.png@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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书写人生
1楼 2017-02-01 03:44:53
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2017-02-01 22:36:40
莫非没有感染成功？感染效率怎么样啊。
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2楼2017-02-01 16:10:43
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lenglychou


发自小木虫Android客户端
3楼2017-02-01 16:22:45
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2017-02-01 22:36:53
听起来是病毒包装不成功。。。
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4楼2017-02-01 21:09:11
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天玑无涯
顶

发自小木虫Android客户端
5楼2017-02-01 21:39:07
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观享世界

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-01 16:10:43
莫非没有感染成功？感染效率怎么样啊。

这个我也考虑过，重复了好几次包装，也不行，也把这个质粒交给其他实验室的做，结果也是一样的

发自小木虫Android客户端
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书写人生
6楼2017-02-02 04:27:36
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magicbard

铁杆木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

puro是不是要Tet-on才表达。。。只用过pLKO.1没用过这个tet-on系统的
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7楼2017-03-22 03:17:41
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