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菜菜菜豆豆

新虫 (小有名气)

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[求助] 蛋白挂不到柱子上,求教已有2人参与

发酵液沉淀，透析，冻干后，用强阳离子交换柱，做纯化，目的蛋白等电点8点多，用pH5的醋酸缓冲液，平衡和淋洗，蛋白都挂不到柱子上，都被冲跑了，很无奈。请大家帮我分析下。谢谢了。

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1楼 2017-01-21 15:34:43

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菜菜菜豆豆

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引用回帖:

4楼: Originally posted by hc-material at 2017-01-22 11:20:50
1。柱子没平衡好。
2。蛋白和介质结合是局部电荷结合，并非和净电荷结合。所以依据pI选缓冲液，填料不一定可靠。同样条件可以试试阴离子Q的，还不挂柱，那就是柱子没平衡好。或者样品没处理好。

目的蛋白等电点8点多，用的强阳离子交换柱，缓冲液用pH5的醋酸缓冲液。平衡5个柱体积。样品为发酵液沉淀，离心，透析，冻干，冻干后并没有用缓冲液溶解。另外，上样时应怎么设置流速和体积等。