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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条带弱，求解决办法。
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心灵覆出

金虫 (小有名气)

[求助] PCR条带弱，求解决办法。 已有1人参与

样品cDNA扩增功能基因nifH时目的条带很弱，很难进行胶回收。扩增条件为：95 5min；94 1min；55 1min；72 1min；35循环，72 10min。广大虫友能否给些意见，感激不尽。

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1楼 2017-01-12 17:10:55
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1，增加模板量，也可使用高保真酶增加循环数。
2，可以第一次pcr产物为模板进行二次pcr，但增加了碱基错配的可能性，建议使用高保真酶。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
3楼2017-01-12 17:17:23
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心灵覆出

金虫 (小有名气)
补充：所使用的引物为polF和polR。

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2楼2017-01-12 17:16:37
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心灵覆出

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-12 17:17:23
1，增加模板量，也可使用高保真酶增加循环数。
2，可以第一次pcr产物为模板进行二次pcr，但增加了碱基错配的可能性，建议使用高保真酶。

我对应的再尝试下。谢谢。

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4楼2017-01-12 17:47:00
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