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心灵覆出

金虫 (小有名气)

[求助] PCR条带弱,求解决办法。已有1人参与

样品cDNA扩增功能基因nifH时目的条带很弱,很难进行胶回收。扩增条件为:95 5min;94 1min;55 1min;72 1min;35循环,72 10min。广大虫友能否给些意见,感激不尽。

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心灵覆出

金虫 (小有名气)

补充:所使用的引物为polF和polR。

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2楼2017-01-12 17:16:37
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1,增加模板量,也可使用高保真酶增加循环数。
2,可以第一次pcr产物为模板进行二次pcr,但增加了碱基错配的可能性,建议使用高保真酶。

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
3楼2017-01-12 17:17:23
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心灵覆出

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-01-12 17:17:23
1,增加模板量,也可使用高保真酶增加循环数。
2,可以第一次pcr产物为模板进行二次pcr,但增加了碱基错配的可能性,建议使用高保真酶。

我对应的再尝试下。谢谢。

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4楼2017-01-12 17:47:00
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