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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请问大家用过fermentas的快切酶么 ？
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卷哥

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by linglingys at 2016-12-23 09:08:46
具体什么影响没研究过，管子变形可能是你用管子质量不太好或者放位置不正

嗯嗯 我把管子放在pcr最中间的位置了 pcr的盖温为105度

发自小木虫IOS客户端
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11楼2016-12-23 09:13:22
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
卷哥: 金币+2 2016-12-27 22:29:51
http://www.docin.com/p-586949133.html
这fermentas双酶切buffer图谱，你可以看一下。
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12楼2016-12-23 10:11:44
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hanzegang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 卷哥 at 2016-12-23 09:06:19
嗯嗯 我昨天加了 不知道加了会对后续的实验有影响没？我那个小EP管昨天从pcr仪里拿出来时都变形了
...

没影响，EP管变形了是因为管子的质量不行，换进口的吧。
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13楼2016-12-24 10:31:12
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hanzegang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
卷哥: 金币+1 2016-12-27 22:27:01
1.终止不终止，构载体的话影响不大。
2.双酶切体系的buffer应该就在你买的酶的袋子里，你再找好。
3.95度5min钟应该是变性，不是退火。加石蜡油是为了防止温度高，EP管里的PCR体系的液体会挥发，有盖子的话加盖子也可以的。
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14楼2016-12-24 10:34:49
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
卷哥: 金币+1 2016-12-27 22:30:55
感觉像穿越。。。
fermentas早被thermo收购了，快切酶都是通用buffer，另外不用终止反应
石蜡油更是上古传说了，那时pcr仪没有heated cover...
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15楼2016-12-26 15:55:43
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xl8284

新虫 (初入文坛)
没必要终止酶切，直接跑胶切胶
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16楼2016-12-26 16:41:27
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卷哥

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by linglingys at 2016-12-23 08:54:08
可以不用终止，酶切完就继续往下做，如果是建库，最好不用快切酶，做一般载体构建快切酶是足够的了

恩恩 好的  谢谢  我就是做载体构建
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17楼2016-12-27 22:24:57
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卷哥

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by linglingys at 2016-12-23 09:01:09
可以的，只要回收有东西，其实连接要不了多少载体的。一般建库就要求多些

恩恩 懂了  谢谢  新手的我真的在小木虫得到很多帮助
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18楼2016-12-27 22:25:27
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卷哥

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by linglingys at 2016-12-23 09:04:27
做PCR现在很少加石蜡油的了

我们的加了  但不知道对之后的有影响不
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19楼2016-12-27 22:25:49
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卷哥

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by hanzegang at 2016-12-24 10:31:12
没影响，EP管变形了是因为管子的质量不行，换进口的吧。...

恩恩  木有进口的    不过没事  只要不影响我接下来的实验  我就可以容忍变形的丑管子  哈哈哈
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20楼2016-12-27 22:26:48
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