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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 谁会，想请教
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斑点windy

铁虫 (著名写手)

[交流] 谁会，想请教

最近做pcr扩增，之前用一家公司的酶扩出来了，因为东西没了，就换了takara的，可是，怎么也扩不出来，就算扩出，条带特别浅，该怎么办［大哭］

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1楼 2016-12-22 14:26:42
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
斑点windy: 金币+1 2016-12-22 17:40:02
引用回帖:
6楼: Originally posted by 斑点windy at 2016-12-22 15:58:12
两步法？为什么？
...

你不是说你能够扩出比较弱的条带。你可以采用两步法，第一步可以设置25个循环，然后用第一步的PCR产物为模板，然后再扩增第二次循环可以设置为30或者35个循环。这样起着富集模板的作用。可以针对基因丰度低的情况，更容易扩增。
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12楼2016-12-22 16:51:59
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baichi121234

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
2楼2016-12-22 14:33:18
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斑点windy

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by baichi121234 at 2016-12-22 14:33:18
该延期了

但愿不要，太痛苦

发自小木虫IOS客户端
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3楼2016-12-22 14:35:46
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
斑点windy: 金币+1 2016-12-22 15:58:22
我只想说takara的酶是真的不太好用，谁用谁知道。你可以尝试下两步法扩增，或者干脆换支好点儿的酶，来扩一下。
赞一下 回复此楼
4楼2016-12-22 14:49:32
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