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凯瑟

新虫 (初入文坛)

[求助] SSR条带不清晰 已有1人参与

跑的是变性的聚丙烯酰胺的凝胶，最近总出现条带模糊的情况，实在找不到原因，寻求各位大神的帮助

SSR条带不清晰


SSR条带不清晰-1


SSR条带不清晰-2


@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-12-20 18:29:12
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wsywxs

木虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-12-28 07:39:36
1.琼脂糖没p出来，换新的引物和试剂试试；2.条带不清晰，可能温度过高弥散了，调低电泳时的电压试试；3.不得不承认pcr和电泳很神奇，换个人做试试，毕竟当局者迷吗？祝好！

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9楼2016-12-24 08:13:00
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duane

至尊木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-21 07:36:20
个人觉得是胶有问题，同样一块胶，同样的marker，跑出来的效果不一样（图3），而且胶两边的条带要比其他的都要清晰。

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2楼2016-12-21 07:09:21
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liugs

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-12-28 07:40:06
本帖内容被屏蔽
3楼2016-12-21 13:41:25
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普通回帖

凯瑟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by duane at 2016-12-21 07:09:21
个人觉得是胶有问题，同样一块胶，同样的marker，跑出来的效果不一样（图3），而且胶两边的条带要比其他的都要清晰。

胶两边的清晰的是marker,pcr产物的条带都是模糊的

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4楼2016-12-23 07:47:07
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爱看小虎牙

金虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-12-28 07:40:30
我研究生做的就是聚丙烯酰胺凝胶！首先你得检查引物的特异性，去ncbi上比对；其次可以提高下退火温度看看；第三，看看你的loading buffer是不是有交叉污染！

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5楼2016-12-23 10:20:01
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凯瑟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 爱看小虎牙 at 2016-12-23 10:20:01
我研究生做的就是聚丙烯酰胺凝胶！首先你得检查引物的特异性，去ncbi上比对；其次可以提高下退火温度看看；第三，看看你的loading buffer是不是有交叉污染！

同样的引物和pcr程序，之前都跑出来清晰的条带了，现在就是跑不清晰了，不知道原因是什么，而且做完pcr之后，用的是以前做过的有条带引物，琼脂糖检测，有的p不出来条带
SSR条带不清晰-3



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6楼2016-12-23 19:06:21
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爱看小虎牙

金虫 (正式写手)
找不出原因就把所有的试剂全都换新的(包括耗材和药品)

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7楼2016-12-24 00:28:01
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旷野の风

金虫 (小有名气)
你好 能把你的聚丙烯酰胺凝胶配方说一下吗？

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8楼2016-12-24 01:03:33
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凯瑟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 爱看小虎牙 at 2016-12-24 00:28:01
找不出原因就把所有的试剂全都换新的(包括耗材和药品)

全换过了一遍，可是没有用

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10楼2016-12-25 15:16:11
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