应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SSR条带不清晰
202/2返回列表上一页12
查看: 2438  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yujiaping1

木虫 (著名写手)
从第一张图看，越两边的样品条带清楚，中间的模糊，这显然是电泳的问题。做微卫星我2007年前后，做了四年，我可以负责任的告诉你，你的引物没有问题，PCR可以提高一下退火温度，当然如果知道什么是touch down PCR，用touch down解决会更好。但是PCR优化只是解决上面那些杂带，让你的条带只有目的带，和主题要解决的电泳模糊问题不相干。电泳的问题挺复杂的，我更怀疑点样孔挂胶的问题，但是不知道你的点样孔是不是和以前一样干净。如果不是电泳空的问题，建议换个电泳槽，看起来溶液不像有问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

凯瑟
11楼2016-12-25 21:45:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜风嫣然

新虫 (正式写手)
调一下电压，把电压调低一些，跑成弧形电压不稳定，检查下有没有漏液现象，上样品的时候在不溢出的情况下多加一些，还有就是我看你每板胶最上面的胶孔样品条带都很清晰，是不是模板加的太多？你扩pcr的时候是多大微升体系？模板是多少？还有就是染板的时候，显色液多加点甲醛

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
12楼2016-12-26 08:46:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜风嫣然

新虫 (正式写手)
还有不要跑太长时间，你这我猜应该超过一个小时了吧？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
13楼2016-12-26 08:48:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯瑟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 夜风嫣然 at 2016-12-26 08:46:35
调一下电压，把电压调低一些，跑成弧形电压不稳定，检查下有没有漏液现象，上样品的时候在不溢出的情况下多加一些，还有就是我看你每板胶最上面的胶孔样品条带都很清晰，是不是模板加的太多？你扩pcr的时候是多大微 ...

pcr产物是25微升体系的，加了2微升的模板，电压是49v，需要跑一宿才跑完，电压调高，条带就会不直，所以不敢调高电压，加快电泳时间啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-12-27 23:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯瑟

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by yujiaping1 at 2016-12-25 21:45:37
从第一张图看，越两边的样品条带清楚，中间的模糊，这显然是电泳的问题。做微卫星我2007年前后，做了四年，我可以负责任的告诉你，你的引物没有问题，PCR可以提高一下退火温度，当然如果知道什么是touch down PCR， ...

点样孔挂胶，是拔梳子的时候没拔好吗？所有的操作步骤都和以前一样，以前成功的现在就是做不出来，再跑也是跑成下面这样，就是不成功，更奇怪的是以前用过的引物，现在再P，P不出条带，引物重新合成了，还是P不出来，模板没有问题，同一批模板别的引物就可以P出来，但是P出来的，做SSR也做不成功
SSR条带不清晰



发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
15楼2016-12-27 23:46:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯瑟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 旷野の风 at 2016-12-24 01:03:33
你好 能把你的聚丙烯酰胺凝胶配方说一下吗？

我用的是试剂盒

发自小木虫Android客户端
回复此楼
16楼2016-12-27 23:48:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜风嫣然

新虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 凯瑟 at 2016-12-27 23:41:44
pcr产物是25微升体系的，加了2微升的模板，电压是49v，需要跑一宿才跑完，电压调高，条带就会不直，所以不敢调高电压，加快电泳时间啊
...

模板加太多了，你是用什么方法提的DNA？提出来浓度测了吗？浓度是多少？还有电压太低，跑的时间太长肯定条带肯定弥散，你用的是什么电泳仪？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
17楼2016-12-28 08:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 凯瑟 at 2016-12-27 23:46:09
点样孔挂胶，是拔梳子的时候没拔好吗？所有的操作步骤都和以前一样，以前成功的现在就是做不出来，再跑也是跑成下面这样，就是不成功，更奇怪的是以前用过的引物，现在再P，P不出条带，引物重新合成了，还是P不出来 ...

你这是什么电泳系统，薄厚多少，怎么会50V跑一夜，我们都是160V，180V跑两三个小时，胶厚度1mm，长度大概180*120。你如果只能过夜，效率太低了，我们一次两张版，加染色一天可以跑六张版，引物优化好的大小差距大，可以同一个板跑两个

关于你之前的问题看来不是挂胶的问题，肯定是电泳系统的问题，换了电泳槽，还不好再说吧

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
18楼2017-01-02 20:05:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lichengpu

新虫 (著名写手)
我觉得是你的DNA略微有降解，如果不是可以换个PCR仪试试。我以前也出现过这样的现象

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
19楼2017-01-02 20:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落璎777

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yujiaping1 at 2016-12-25 21:45:37
从第一张图看，越两边的样品条带清楚，中间的模糊，这显然是电泳的问题。做微卫星我2007年前后，做了四年，我可以负责任的告诉你，你的引物没有问题，PCR可以提高一下退火温度，当然如果知道什么是touch down PCR， ...

你好，想请教一下聚丙烯酰胺凝胶电泳的配制方法。新手，第一次接触微卫星，请大神指教

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
20楼2017-03-15 11:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凯瑟 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +5 fummck 2026-05-20 5/250 2026-05-20 15:01 by 六两废铜
[基金申请] 今年审到国自然15份，谈谈感受 +19 国自然国社科中 2026-05-17 20/1000 2026-05-20 14:14 by 仲夏夜的星星
[基金申请] 评审有感 +13 popular289 2026-05-18 22/1100 2026-05-20 11:28 by 水和泥不是水泥
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 6/300 2026-05-20 10:36 by xtlilibin
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[基金申请] 河北省自然科学基金 +3 Peterchao 2026-05-18 3/150 2026-05-20 08:57 by 霸_霸
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +12 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 13/650 2026-05-20 08:34 by xli1984
[文学芳草园] 献血感触 +6 呀呀好傻 2026-05-19 11/550 2026-05-19 22:26 by 而立得乐
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +3 光伏爱好者 2026-05-17 5/250 2026-05-19 19:13 by 光伏爱好者
[基金申请] 2026山东省优青 +3 luckinging 2026-05-14 4/200 2026-05-19 16:15 by 52wls
[考博] 找博士生导师 +6 小代想上岸 2026-05-15 7/350 2026-05-19 10:22 by free_fisher
[考博] 26/27申博自荐-锂/钠电池方向 5+3 狗头军师. 2026-05-15 4/200 2026-05-19 09:10 by moonboat
[基金申请] 同样的基金本子，换个专家直接从C变A！ (金币-10) +3 国自然国社科中 2026-05-19 3/150 2026-05-19 08:50 by Equinoxhua
[基金申请] 别被青基扩招骗了！26年科研内卷才刚刚开始 +3 国自然国社科中 2026-05-14 4/200 2026-05-19 08:48 by archvillain
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +7 小王求读研 2026-05-15 8/400 2026-05-19 08:27 by zhyzzh
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 6/300 2026-05-16 19:46 by Equinoxhua
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭