24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2367  |  回复: 19

yujiaping1

木虫 (著名写手)

从第一张图看,越两边的样品条带清楚,中间的模糊,这显然是电泳的问题。做微卫星我2007年前后,做了四年,我可以负责任的告诉你,你的引物没有问题,PCR可以提高一下退火温度,当然如果知道什么是touch down PCR,用touch down解决会更好。但是PCR优化只是解决上面那些杂带,让你的条带只有目的带,和主题要解决的电泳模糊问题不相干。电泳的问题挺复杂的,我更怀疑点样孔挂胶的问题,但是不知道你的点样孔是不是和以前一样干净。如果不是电泳空的问题,建议换个电泳槽,看起来溶液不像有问题

发自小木虫IOS客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

11楼2016-12-25 21:45:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜风嫣然

新虫 (正式写手)

调一下电压,把电压调低一些,跑成弧形电压不稳定,检查下有没有漏液现象,上样品的时候在不溢出的情况下多加一些,还有就是我看你每板胶最上面的胶孔样品条带都很清晰,是不是模板加的太多?你扩pcr的时候是多大微升体系?模板是多少?还有就是染板的时候,显色液多加点甲醛

发自小木虫Android客户端
12楼2016-12-26 08:46:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜风嫣然

新虫 (正式写手)

还有不要跑太长时间,你这我猜应该超过一个小时了吧?

发自小木虫Android客户端
13楼2016-12-26 08:48:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯瑟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 夜风嫣然 at 2016-12-26 08:46:35
调一下电压,把电压调低一些,跑成弧形电压不稳定,检查下有没有漏液现象,上样品的时候在不溢出的情况下多加一些,还有就是我看你每板胶最上面的胶孔样品条带都很清晰,是不是模板加的太多?你扩pcr的时候是多大微 ...

pcr产物是25微升体系的,加了2微升的模板,电压是49v,需要跑一宿才跑完,电压调高,条带就会不直,所以不敢调高电压,加快电泳时间啊

发自小木虫Android客户端
14楼2016-12-27 23:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯瑟

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by yujiaping1 at 2016-12-25 21:45:37
从第一张图看,越两边的样品条带清楚,中间的模糊,这显然是电泳的问题。做微卫星我2007年前后,做了四年,我可以负责任的告诉你,你的引物没有问题,PCR可以提高一下退火温度,当然如果知道什么是touch down PCR, ...

点样孔挂胶,是拔梳子的时候没拔好吗?所有的操作步骤都和以前一样,以前成功的现在就是做不出来,再跑也是跑成下面这样,就是不成功,更奇怪的是以前用过的引物,现在再P,P不出条带,引物重新合成了,还是P不出来,模板没有问题,同一批模板别的引物就可以P出来,但是P出来的,做SSR也做不成功
SSR条带不清晰



发自小木虫Android客户端
15楼2016-12-27 23:46:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯瑟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 旷野の风 at 2016-12-24 01:03:33
你好 能把你的聚丙烯酰胺凝胶配方说一下吗?

我用的是试剂盒

发自小木虫Android客户端
16楼2016-12-27 23:48:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜风嫣然

新虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 凯瑟 at 2016-12-27 23:41:44
pcr产物是25微升体系的,加了2微升的模板,电压是49v,需要跑一宿才跑完,电压调高,条带就会不直,所以不敢调高电压,加快电泳时间啊
...

模板加太多了,你是用什么方法提的DNA?提出来浓度测了吗?浓度是多少?还有电压太低,跑的时间太长肯定条带肯定弥散,你用的是什么电泳仪?

发自小木虫Android客户端
17楼2016-12-28 08:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 凯瑟 at 2016-12-27 23:46:09
点样孔挂胶,是拔梳子的时候没拔好吗?所有的操作步骤都和以前一样,以前成功的现在就是做不出来,再跑也是跑成下面这样,就是不成功,更奇怪的是以前用过的引物,现在再P,P不出条带,引物重新合成了,还是P不出来 ...

你这是什么电泳系统,薄厚多少,怎么会50V跑一夜,我们都是160V,180V跑两三个小时,胶厚度1mm,长度大概180*120。你如果只能过夜,效率太低了,我们一次两张版,加染色一天可以跑六张版,引物优化好的大小差距大,可以同一个板跑两个

关于你之前的问题看来不是挂胶的问题,肯定是电泳系统的问题,换了电泳槽,还不好再说吧

发自小木虫IOS客户端
18楼2017-01-02 20:05:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lichengpu

新虫 (著名写手)

我觉得是你的DNA略微有降解,如果不是可以换个PCR仪试试。我以前也出现过这样的现象

发自小木虫Android客户端
19楼2017-01-02 20:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落璎777

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by yujiaping1 at 2016-12-25 21:45:37
从第一张图看,越两边的样品条带清楚,中间的模糊,这显然是电泳的问题。做微卫星我2007年前后,做了四年,我可以负责任的告诉你,你的引物没有问题,PCR可以提高一下退火温度,当然如果知道什么是touch down PCR, ...

你好,想请教一下聚丙烯酰胺凝胶电泳的配制方法。新手,第一次接触微卫星,请大神指教

发自小木虫IOS客户端
20楼2017-03-15 11:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凯瑟 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程与技术324调剂 +16 孙常华 2026-04-09 17/850 2026-04-10 05:17 by chenzhimin
[考研] 293调剂 +23 yj1221 2026-04-08 24/1200 2026-04-09 23:26 by may_新宇
[考研] 087100初试311求调剂 +3 任雅琴 2026-04-09 3/150 2026-04-09 22:42 by lbsjt
[考研] 278求调剂 +27 范婷娜 2026-04-07 31/1550 2026-04-09 20:49 by zhouxiaoyu
[考研] 291分调剂 +3 上岸小莹加油 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:28 by 1753564080
[硕博家园] 有没有学校材料专业收跨调(一志愿085410) +5 momo(上岸版) 2026-04-06 8/400 2026-04-09 15:07 by only周
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +3 弱水听文 2026-04-09 3/150 2026-04-09 09:06 by susuqq
[考研] 求调剂 +7 chenxrlkx 2026-04-05 9/450 2026-04-09 09:04 by wj165256
[考研] 一志愿211,化学310分,本科重点双非,求调剂 +13 努力奋斗112 2026-04-08 13/650 2026-04-08 21:17 by 学员tURuqU
[考研] 320分人工智能调剂 +9 振—TZ 2026-04-03 10/500 2026-04-08 19:56 by 振—TZ
[考研] 327求调剂 +12 Xxjc1107. 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:46 by luoyongfeng
[考研] 298求调剂 +4 残荷新柳 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:02 by lbsjt
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
[考研] 农学,求调剂,314分 +4 访客记录可爱 2026-04-04 4/200 2026-04-07 21:07 by 等岸
[考研] 一志愿华中农业大学0710(A)初试329分 求调剂 +5 一名26考研生 2026-04-04 5/250 2026-04-07 08:54 by 18828373951
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9,326分 +6 刘墨墨 2026-04-06 6/300 2026-04-06 19:36 by lijunpoly
[考研] 331求调剂 +8 于征yz 2026-04-05 8/400 2026-04-06 00:54 by fmesaito
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 一志愿江南大学085501机械工程专硕326分,本科佳木斯大学 +5 顾若浮生 2026-04-03 9/450 2026-04-05 09:57 by 1753564080
[考研] 求调剂,一志愿南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-04-03 10/500 2026-04-04 09:01 by T可可西里T
信息提示
请填处理意见