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凯瑟

新虫 (初入文坛)

[求助] SSR条带不清晰 已有1人参与

跑的是变性的聚丙烯酰胺的凝胶,最近总出现条带模糊的情况,实在找不到原因,寻求各位大神的帮助

SSR条带不清晰


SSR条带不清晰-1


SSR条带不清晰-2


@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

从第一张图看,越两边的样品条带清楚,中间的模糊,这显然是电泳的问题。做微卫星我2007年前后,做了四年,我可以负责任的告诉你,你的引物没有问题,PCR可以提高一下退火温度,当然如果知道什么是touch down PCR,用touch down解决会更好。但是PCR优化只是解决上面那些杂带,让你的条带只有目的带,和主题要解决的电泳模糊问题不相干。电泳的问题挺复杂的,我更怀疑点样孔挂胶的问题,但是不知道你的点样孔是不是和以前一样干净。如果不是电泳空的问题,建议换个电泳槽,看起来溶液不像有问题

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11楼2016-12-25 21:45:37
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duane

至尊木虫 (正式写手)

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-21 07:36:20
个人觉得是胶有问题,同样一块胶,同样的marker,跑出来的效果不一样(图3),而且胶两边的条带要比其他的都要清晰。

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2楼2016-12-21 07:09:21
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liugs

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-12-28 07:40:06
本帖内容被屏蔽

3楼2016-12-21 13:41:25
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凯瑟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by duane at 2016-12-21 07:09:21
个人觉得是胶有问题,同样一块胶,同样的marker,跑出来的效果不一样(图3),而且胶两边的条带要比其他的都要清晰。

胶两边的清晰的是marker,pcr产物的条带都是模糊的

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4楼2016-12-23 07:47:07
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